于云祥 龚泰芳 刘小涛 柯文 李彬彬 廉凯 徐进△

骨肉瘤是常见的原发性恶性骨肿瘤，恶性程度高，预后差，5年生存率低[1]。近年分子靶向治疗成为肿瘤治疗研究热点。尽管骨肉瘤治疗方法已不断更新，但是治疗效果却不甚理想，寻找有效的治疗方法具有重要的意义。SOX7是含高迁移率组蛋白(HMG)结构域的SOX基因家族SOXF亚组成员之一，在癌症中低表达，对肿瘤发生发展具有重要作用[2-4]。有研究表明miR-664能通过靶向抑制SOX7增强骨肉瘤细胞的侵袭和迁移能力[5]。Wnt/β-catenin信号通路是比较经典的信号转导途径，与肿瘤发展密切相关，如下调RIPK4可通过抑制Wnt/β-catenin信号通路抑制骨肉瘤细胞增殖[6]。但SOX7与骨肉瘤细胞凋亡、免疫反应及其可能相关的Wnt/β-catenin信号通路的关系还未明确。鉴于此，本研究通过建立重组体pcDNA3.1-SOX7，旨在探讨过表达SOX7对骨肉瘤细胞生长、周期、凋亡、免疫抑制因子VEGF和TGF-β1表达及Wnt/β-catenin信号通路的影响。

1 材料与方法

1.1 试剂和仪器

RPMI-1640培养基、CCK-8试剂盒均购自美国Sigma；FBS购自美国Gibco；pcDNA3.1载体及Lipofectamine 2000试剂盒均购自Invitrogen 公司；SOX7、β-catenin、cyclinD1、survivin、VEGF和TGF-β1抗体及HRP标记的二抗均购自美国CST；细胞凋亡试剂盒、流式细胞仪均购自美国BD；酶标仪及凝胶成像系统均购自美国Bio-Rad。

1.2 方法

1.2.1细胞培养 人骨肉瘤MG-63细胞株购自中国科学院上海细胞库。细胞用RPMI-1640培养基(含100 U/mL青霉素、100 U/mL链霉素及10% FBS)，在5%CO2、37 ℃恒温、饱和湿度条件下传代培养。细胞生长状态良好时用于实验。每2～3 d换液1次，依据细胞密度传代。

1.2.2细胞转染 转染前24 h调整MG-63细胞密度，以2 mL/孔(5×105/mL)接种于6孔板。分为重组pcDNA3.1-SOX7组、pcDNA3.1组和空白组。无双抗的完全培养基培养MG-63细胞24 h，使转染时细胞达90%～95%的细胞密度。……