邱栎臻，杨明珠，骈红茹，郑 直

(中国医学科学院基础医学研究所 北京协和医学院基础学院 生物化学与分子生物学系，北京 100005)

核酸检测在疾病筛查、用药指导、预后判断和监测等方面扮演重要角色，在新型冠状病毒病(corona virus disease,COVID-19)的防控、筛查、治疗过程中体现得淋漓尽致[1-2]。其中聚合酶链式反应(PCR)和反转录聚合酶链式反应(reverse transcription polymerase chain reaction, RT-PCR)一直是实验室进行分子诊断和病原学检测的金标准[3]，PCR方法以其高灵敏度和高特异性这一特点被广泛使用，然而这种方法需要高昂的成本，需要基于实验室的设备和专业知识，应用到现场检测需要克服许多不利因素，因此研究人员逐渐将目光转向利用单一温度进行扩增的技术[4-5]。

环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification, LAMP)是21世纪发展起来的一种新颖的等温核酸扩增技术，与普通PCR比起来不需要温度控制精确的模块体系，恒温完成扩增，具有高灵敏度，高特异性和快速扩增的优点[6-8]。现在发展成不依赖昂贵的PCR仪就能实现现场高通量快速检测的一种方法，检测成本远低于荧光定量PCR,可作为快速简便的诊断方法来检测和识别病原微生物感染[9]。本研究拟建立一种基于磁珠捕获的免提核酸环介导恒温扩增技术CLIP-LAMP (capture and ligation probe-LAMP)，能够快速、简便地进行大体积病原体检测。

1 材料与方法

1.1 材料

主要试剂：1 μmol/L链霉亲和素磁珠(Invitrogen公司)； T4 多聚核苷酸激酶、BstDNA 聚合酶大片段和1× ThermoPol 反应缓冲液(New England Biolabs， NEB 公司)；裂解液、洗液(Diacutate 公司)；T4 DNA 连接酶(北京康为世纪生物科技有限公司);甜菜碱(Sigma-Aldrich公司)； dNTPS [宝日医生物技术(北京)有限公司]；……