周卓琳， 刘秀洁， 王新雨， 王淑远， 宋正阳， 田云娜，张 赛， 黄丹娜， 王万铁△

（1温州医科大学缺血-再灌注损伤研究所，浙江温州 325035；2温州市人民医院呼吸内科，浙江温州 325035）

缺血再灌注损伤是器官血流中断引起局部缺血，再灌注后组织损伤进一步加重的现象。近些年，肺缺血再灌注损伤（lung ischemia-reperfusion injury，LIRI）已成为肺移植和心脏搭桥等术后常见而严重的并发症［1］。LIRI 的发病机制十分复杂，且目前尚未完全阐明。因此，深入研究LIRI 的发病机制对于寻找减少组织损伤的新疗法具有重要意义。

核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3（nucleotide-binding oligomerization domain-like receptor protein 3，NLRP3）炎症小体是一种多蛋白复合物，由NLRP3、含caspase 募集结构域的凋亡相关斑点样蛋白（apoptosis-associated speck-like protein containing a caspase recruitment domain，ASC）和pro-caspase-1 组成，在经典细胞焦亡（pyroptosis）通路中起着重要作用［2］。NLRP3 炎症小体能激活caspase-1，随后，活化的caspase-1 又对gasdermin D（GSDMD）和白细胞介素1β 前体（pro-interleukin-1β，pro-IL-1β）进行切割形成GSDMD-N 和IL-1β，该过程被称为细胞焦亡［3］。适度的细胞焦亡能清除入侵的病原体，维持机体平衡，而过度的细胞焦亡会引起细胞死亡，组织损伤和器官衰竭［4-5］。最近研究表明，NLRP3 炎症小体介导的细胞焦亡，参与了LIRI 的发生发展过程［6］，但其具体机制并不清楚。因此，本实验通过建立大鼠肺泡II 型上皮细胞（type II alveolar epithelia cells，AEC II）缺氧/复氧损伤细胞模型，探讨NLRP3 炎症小体介导的细胞焦亡在大鼠AEC II 缺氧/复氧损伤中的作用及其机制。

材 料 和 方 法

1 实验细胞

大鼠AEC II购于上海富衡生物有限公司。

2 主要试剂和仪器

RPMI-1640 培养液购自Gibico；胎牛血清购自ExCell Bio；LPS 购自Sigma；ATP 和MCC950 购自MedChemExpress；CCK-8 试剂盒购自日本同仁；乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase，LDH）试剂盒、caspase-1活性检测试剂盒、抗GAPDH、辣根酶标记山羊抗鼠Ⅱ抗、辣根酶标记山羊抗兔Ⅱ抗和Alexa Fluor 488 标记山羊抗兔Ig G 购于中国碧云天生物技术研究所；……