杨文俊， 肖迎港， 张 扬， 陆大浩， 李华玲， 高 巨△

（1扬州大学临床医学院附属苏北人民医院麻醉科，2扬州大学，江苏扬州 225001）

慢性阻塞性肺疾病（chronic obstructive pulmonary disease，COPD）是一种以气流受限为特征的肺部疾病，气流受限不完全可逆，呈进行性发展。COPD 的炎性损伤涉及肺部及其他肺外器官［1］。近年来全球范围内的COPD 发病率与死亡率都急剧上升，预计到2030 年，COPD 将成为世界第三大死因和第五大致残原因［2］。维甲酸受体反应蛋白2（retinoic acid receptor responder 2，RARRES2）是与肺、皮肤和心血管等多个器官炎症和免疫代谢疾病的发生息息相关的脂肪因子之一［3］。目前已有研究证明，RARRES2 在COPD 发展中表达异常，可能与COPD发展中的炎性损伤有关［4］。核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3（nucleotide-binding oligomerization domain-like receptor protein 3，NLRP3）是参与炎症反应的重要蛋白，可能在COPD 炎性损伤中的发挥重要作用［5］。然而目前对RARRES2在COPD 中NLRP3炎症小体的作用知之甚少。本研究旨在探寻RARRES2 在COPD 小鼠中的作用以及RARRES2 是否通过NLRP3炎症小体调控COPD的炎性损伤。

材 料 和 方 法

1 实验动物

SPF 级野生型雌性C57BL/6J 小鼠32 只，10～12周龄，体质量（18±2）g，由扬州大学动物实验中心提供，许可证号为SYXK（苏）2017-0044。

2 主要试剂与仪器

RARRES2-siRNA 及阴性对照（negeative control，NC）siRNA（Cohesion）；小鼠白细胞介素1β（interleukin-1β，IL-1β）和IL-18 ELISA 试剂盒（Thermo Fisher Scientific）；RARRES2 抗体（Abcam）；NLRP3、caspase-1、IL-1和IL-18抗体（中国武汉赛维尔生物科技有限公司）；大前门香烟（焦油10 mg，烟碱0.8 mg，CO 12 mg）。自制烟熏有机玻璃舱（规格40 cm×30 cm×16 cm）。实验中RARRES2-siRNA 及NC siRNA分别溶解于不含RNA 的无菌水中，与适量阳离子脂质体（Lipofectamine）于室温下温育30 min 以形成siRNA-Lipofectamine 复合体（10 g/L），以用于小鼠尾静脉注射。

3 实验方法

3.1 COPD 小鼠模型的构建 将入选的野生型C57BL/6J 小鼠随机分成4 组（n=8）：空白对照小鼠组（control 组）、COPD 小鼠组（COPD 组）、注射NC siRNA 的COPD 小鼠组（COPD+NC 组）和注射RARRES2-siRNA 的COPD 小鼠组（COPD+siRNA组），所有动物饲养和处置过程均符合规范。……