姜 羽 吕国伟 张文进 张 辉

胶质瘤是中枢神经系统最常见的原发性恶性肿瘤[1，2]。Wnt通路是细胞内一条在进化过程中高度保守的信号通路，分为4个分支，其中Wnt/β-catenin是经典路径，在肿瘤细胞增殖、凋亡、间质转化等多个方面具有调控作用[3，4]。研究表明，Wnt/β-catenin 通路的异常激活与胶质瘤等多种肿瘤有关[3，4]。槐定碱具有抗炎等药理学活性[5]，对多种肿瘤细胞有调控作用[6，7]。本研究探讨槐定碱对人胶质瘤U87细胞系的生物学行为产生影响，为胶质瘤的治疗寻找新的有效药物提供理论支撑。

1 材料与方法

1.1 细胞培养 将胶质瘤U87 细胞株（中国科学院上海细胞库）于含10%胎牛血清和1%双抗的1640 培养液（美国Invitrogen 公司）中培养，待细胞生长汇合度达到80%以上时进行传代。以5×105个/孔密度接种于6 孔板培养16 h，加入槐定碱（上海将来实业股份有限公司，批号060736，纯度＞99.0%），浓度分别为0 mg/ml（对照组）、1.0（低剂量）、2.0（中剂量）、3.0（高剂量）mg/ml，每个浓度设置6 个复孔，继续培养24 h，光学显微镜下观察细胞形态。

1.2 细胞迁移U87 细胞与槐定碱共培养24 h，不含胎牛血清的RPMI-1640 培养液中饥饿处理12 h；用10 μl 的移液枪头垂直于板面划痕，每4 h 观察一次细胞迁移状态，倒置荧光显微镜下拍照，作图软件处理，计算每组细胞24时和0时的划痕宽度之比。

1.3 细胞侵袭U87 细胞与槐定碱共培养24 h，不含胎牛血清的培养基中饥饿处理12 h，胰蛋白酶消化后洗涤、离心，用不含胎牛血清的培养基重悬，调整密度约2×105个/ml；将Transwell 小室（上海Abcam公司）置于24孔板内，加入300 μl完全培养液，室温下静置30 min，使基质胶水化，向外室内加入500 μl完全培养液，将200 μl 细胞悬液接种于小室内，培养24 h，进行GISMA 染色，用棉签擦拭小室内侧，流水冲洗染液；……