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不同DNA提取方法对高通量测序检测沉积物微生物多样性的影响

2021-11-06王志龙李春筱蔡一鸣夏雪山

关键词:物种方法

王志龙,李春筱,蔡一鸣,夏雪山,刘 丽

(昆明理工大学 生命科学与技术学院,云南 昆明 650500)

0 引言

湖泊富营养化是全球水环境面临的重大问题,湖泊沉积物作为水体营养物质的主要来源直接影响着水体富营养化[1].沉积物和水体中微生物群落通过参与营养物质的转化、降解,推动物质循环、能量流动进而影响着整个湖泊生态系统[2-3].因此,沉积物的微生物群落分析对于研究湖泊环境变化有极为重要的意义.

近年来,高通量测序的兴起使全面分析环境微生物群落成为微生物研究的热点.通过测序分析可检测样品中的优势微生物类群及群落中的稀有物种等,进而阐明微生物多样性[4-5].然而,获得高质量的基因组DNA是高通量测序的基础[6].湖泊沉积物中因存在大量的腐殖酸、多糖和盐类等不易去除的杂质,导致DNA提取的效率和质量以及后续的测序会受到严重影响[7].目前,对于沉积物基因组DNA提取的方法主要有:手提法、试剂盒法以及二者相结合的方法.手提法是使用类似CTAB、SDS、溶菌酶、蛋白酶K等具有裂解细胞或降解蛋白质作用的试剂,使DNA游离;或者加入聚乙二醇(PEG)诱导大分子沉淀,从而提高DNA质量;去腐剂聚乙烯吡咯烷酮(PVP)能够去除沉积物中的腐殖酸和多酚等杂质.试剂盒法是通过使用生物公司生产的商业试剂盒,对沉积物基因组DNA进行提取,虽然DNA提取浓度相比手提法较低,但是操作步骤简单便捷.

不同DNA提取方法会影响不同环境样品的提取效……

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