袁佳栎 李瑛泽 莫斌峰 饶俊峰 王群山

脉冲电场消融(PFA)是对不良细胞/组织施加高强脉冲电场,使细胞发生不可逆电穿孔(irreversible electroporation,IRE),进而凋亡的消融方法。相较于其他细胞,心肌细胞对电穿孔的阈值低[1－3]。因此,PFA 具有较好的组织选择性,并且无明显温度效应,使得其在心脏心律失常消融中具有非常大的应用前景,能有效减少消融相关并发症。近几年,大量证据包括动物及临床实验证实,心脏PFA 是一种安全、有效的新能量[4－8]。

脉冲电场对细胞的研究多集中在肿瘤细胞中,电穿孔对体外人心肌细胞的影响和机制的研究相对缺乏。已有部分研究证实了脉冲电场在小鼠胚胎心肌细胞H9C2中的作用[9],但脉冲电场在人心肌细胞的研究尚缺乏。因此,笔者对于脉冲电场对体外人心室肌细胞AC16细胞的作用和初步机制进行了探索。

1 材料与方法

1.1 主要试剂 AC16人心室细胞系,购自中国科学院。高糖DMEM 培养基(Cytiva);青霉素/链霉素溶液(Yeasen);0.25%胰酶-EDTA(Thermo);澳洲胎牛血清(Cytiva)。无菌低电导脉冲电场溶液如已有研究所示[9],含有10 mmol/L 磷酸钠,1 mmol/L氯化镁,250 mmol/L 蔗糖,将p H 值用氢氧化钠溶液调至7.4,再使用0.22μm 滤器(Merck)过滤。台盼蓝染色试剂盒(Beyotime);CCK-8试剂盒(Beyotime);Annexin V-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒(Yeasen)。

1.2 脉冲刺激模型的建立 常规培养人心室肌AC16细胞于含有10%FBS、1%青霉素/链霉素高糖全培养基中,5%CO2、37℃。收集指数生长期的AC16细胞,胰酶消化离心后,用无菌的低电导溶液制作细胞悬液,用以避免由于热效应导致的细胞损伤,并调节细胞浓度为2×106个/ml。细胞悬液加入至4 mm 电极杯(BTX)中。对照组不进行电穿孔刺激,实验组使用ECM830(BTX)电穿孔仪进行由低到高不同电压电刺激。……