石松， 薛殿婷， 张培， 石静**， 孙达权**

(1.黔东南苗族侗族自治州人民医院 重症医学科， 贵州 凯里 556000； 2.贵州医科大学 基础医学院 生化与分子生物学教研室， 贵州 贵阳 550025)

人丝裂原激活蛋白激酶3(mitogen-activated protein kinase 3，MAPK3)又叫细胞外信号调节激酶1(extracellular signal-regulatedkinase 1，ERK1)，是由第16号染色体p11.2处的MAPK3基因编码，是大鼠肉瘤原癌蛋白(rat sarcoma proto-oncoprotein，Ras)-快速加速纤维肉瘤激酶(rapidly accelerated fibrosarcoma kinase，Raf)-丝裂原活化蛋白激酶的激酶(mitogen-activated protein kinase kinase，MEK)-丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase，MAPK)信号通路的关键成员之一[1-3]。有研究表明，丝裂原活化蛋白激酶1/3(mitogen-activated protein kinase 1/3，MAPK1/3)与细胞的生长增殖、自噬存活及迁移等功能密切相关[4-8]；同时，MAPK1/3也参与多种病理进程，许多原癌基因编码的蛋白可通过ERK/MAPK信号通路实现相应的细胞学效应，而ERK/MAPK信号通路的持续激活可以加速诱发肿瘤发生、发展和恶化[9-13]。目前，虽然有许多文献描述了MAPK1/3在肝癌等多种肿瘤中的作用，但单独研究MAPK3对肝癌作用的文献不多。本研究克隆了人MAPK3基因的蛋白编码区、构建原核表达载体、用IPTG诱导MAPK3在细菌中表达，并用Sepharose 4B纯化MAPK3蛋白，为后续研究MAPK3的生物学功能奠定基础。

1 材料与方法

1.1 实验材料

1.1.1细胞和血清来源 正常人肝细胞系HL-7702细胞购自中科院上海细胞库，新生牛血清购自杭州四季青。

1.1.2主要试剂和仪器 固体粉末细胞培养基RPMI-1640(美国Gibco)，TRIzol(美国Invitrogen)，mRNA反转录试剂盒、高保真Taq DNA polymerase、3′末端加脱氧核糖腺苷酸(deoxyriboadenosine，A)试剂盒、脱氧核糖胸苷酸-脱氧核糖腺苷酸(deoxythymidylate-deoxyriboadenosine，T-A)克隆试剂盒、大肠杆菌RY13株的第一种限制性内切酶(escherichia coli RY13Ⅰ，EcoR Ⅰ)、黄单胞菌的第一种限制性内切酶(Xanthomonas holcicola Ⅰ，XhoⅠ)、T4 DNA ligase及DNA纯化回收试剂盒(大连宝生物)，谷胱甘肽硫转移酶(glutathione S-transferase，GST)标签抗体……