王旭辉，周 倩，凌小敏，刘军建，康立山，顾春银

(信达生物制药(苏州)有限公司 新药研究部，江苏 苏州 215123)

近年来，体外展示技术如噬菌体展示、酵母展示在单克隆抗体或融合蛋白药物的发现与工程改造中得到广泛应用[1-6]。体外展示技术获得的候选分子，具有丰富的结合表位及种属交叉性，经过抗体的亲和力成熟，可获得更高亲和力的抗体分子[7]。与噬菌体展示相比，酵母是真核生物，具有翻译后修饰的能力；同时结合流式细胞荧光分选(简称流式分选)技术实时可见的特点，酵母展示在抗体亲和力成熟中具有更显著的优势[4]。但传统酵母展示技术只将特定蛋白展示于表面[1-3]，无法同时将抗体分泌至培养基上清以用于亲和力测定；需要在哺乳动物细胞体系中表达、纯化，获得蛋白样品后方能进行亲和力测定，在通量、成本、周期上存在瓶颈。

虽已有文献提出了多种解决方案，但均存在一定的局限性。如，将酵母细胞分泌的抗体重新捕获进而展示于表面的技术[8]，存在基因型与表型不能有效保持一致的风险；尽管通过使用黏性缓冲液与避免剧烈振动可以降低风险，但操作上技术难度很大，使得此方法不具备通用性。此外，2015年Adimab公司报道了一种经过改造的酿酒酵母，可在特定条件下利用人工合成氨基酸翻译终止密码子UAG，进而实现展示与分泌的切换[9]，但由于UAG翻译效率的限制，使得抗体在酵母细胞表面展示的丰度大大下降，影响了文库的筛选效率。……