陆伟辉， 刘 威， 王 聪， 王正林

（1.复旦大学附属中山医院青浦分院普外科，上海 201700；

2.复旦大学附属中山医院普外科，上海 200032）

CXC类趋化因子受体2（C-X-C motif chemokine receptor，CXCR2）是促炎趋化因子的主要受体，主要表达于中性粒细胞、浆细胞、单核细胞、巨噬细胞以及内皮细胞[1-3]。其与肿瘤发生、发展密切相关。Robinson等[4]研究显示，CXCR2促进脑肿瘤的生长及进展。CXCR2活化促进乳腺癌侵袭、转移[5]。既往研究显示CXCR2在胃癌组织中高表达，是胃癌病人的独立不良预后因素[6-8]，但其作用机制仍不明确。本研究旨在探索CXCR2对胃癌细胞侵袭、迁移和凋亡的影响。

材料与方法

一、材料

胎牛血清 （批号：16000-044）、Trizol试剂 （批号：15596-026）、Optim-MEM 培养基 （批号：51985-034）均购自美国Gibco公司。RPMI-1640培养基（批号：R8758）购自Sigma公司。细胞计数试剂盒（CCK-8，批号：C0038）购自 Beyotime公司。 CXCR2 siRNA（批号：AM16708）和 Lipofectamine 2000 购自Invitrogen公司。膜联蛋白Ⅴ（AnnexinⅤ）/碘化丙啶（propidium iodide,PI）凋亡检测试剂盒（批号：556547）购自BD Pharmingen公司。白细胞介素8（interleukin 8,IL-8）ELISA试剂盒（批号：D8000C）购自R&D公司。CXCR2抗体（批号：ab14935）购自Abcam公司。Transwell侵袭小室（批号：3422）购自美国Costar公司。

二、细胞培养与转染

人胃癌细胞SGC-7901、MGC80-3购自中国科学院上海生命科学研究院。所有细胞培养于含10%胎牛血清的RPMI-1640培养基中，在37℃、5% CO2培养箱培养。

三、蛋白质印迹法

收集细胞，用细胞裂解液裂解细胞提取总蛋白。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE）分离，恒流300 mA转移至聚偏氟乙烯（polyvinylidene fluoride,PVDF）膜。磷酸缓冲盐溶液（phosphatebuffersaline,PBS）洗涤膜3次，每次5min，加入适当比例稀释的一抗，4℃过夜。去除洗涤液，立即加入稀释的二抗，摇摆床上室温培养2 h。结束后去除洗涤液，PBS中洗涤3次，每次10 min。取电化学发光 （electrochemilumine scence,ECL）试剂加膜上，约1 min，使用计算机自动显影系统（ImageQuant LAS 4000 mini）进行显影。……