马静 张楠 马斌林

甲状腺癌在全世界的发病率迅猛上升，甲状腺乳头状癌是其中占比最多的病理类型。甲状腺乳头状癌缺乏特征性的术前检测标志物。微小RNA(microRNA，miRNA)是一类非编码单链小RNA分子，在多种人类疾病，包括癌症中都表现出了功能异常或者表达异常[1]。miRNA-451位于17号染色体着丝粒附近，现有多项研究提示，miRNA-451在甲状腺乳头状癌组织中呈现低表达，且其表达的下调与甲状腺乳头状癌的发生有关。但是关于血清miRNA-451与甲状腺乳头状癌的关联研究并不多见。本研究采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测了36例甲状腺乳头状癌病人血清中miRNA-451的表达情况，分析了其表达与病人临床病理特征之间的关系，意在了解检测血清miRNA-451是否对甲状腺乳头状癌的术前诊断有帮助。

对象与方法

一、对象

2019年4～ 5月在我院接受手术治疗并且病理诊断明确的甲状腺肿瘤病人73例为研究对象(术前抽取血清备用)。其中36例为甲状腺乳头状癌病人，37例为甲状腺良性肿瘤。36例甲状腺乳头状癌病人中，男性7例，女性29例；平均年龄为(49.47±8.24)岁，其中≤55岁10例，>55岁26例；病灶位于单侧的30例，双侧6例；单个病灶25例，多个病灶11例；无淋巴结转移18例，有淋巴结转移18例。

二、方法

1.材料：36例甲状腺乳头状癌和37例甲状腺良性肿瘤病人的血清样本。

2.步骤：MiRcute Serum/Plasma miRNA Isolation Kit提取血浆总 RNA，采用反转录试剂miRNA First Strand cDNA Synthesis反转录获得 cDNA。采用qRT-PCR 仪对 miR-451进行扩增。反应体系：正、反引物(10 μmol/l)各0.5 μl，聚合酶和绿色荧光染料的预混液5.0 μl，cDNA(50 ng/μl)1.0 μl，RT-PCR试剂盒中水3.0 μl，共10 μl。反应条件设置如下：95 ℃ 90 s，95 ℃ 30 s，62 ℃ 30 s，72 ℃ 20 s，共40个循环。反应结束后，以miR-39为外参，采用 2-△△Ct法对miR-451a在不同血浆样品中的相对表达量进行分析。