吴树军 苏文涛 刘建军 张军民

前列腺癌(prostate cancer，PCa)是我国男性常见的泌尿系统恶性肿瘤，近年来我国PCa发病率呈快速上升趋势，由于PCa导致的死亡患者逐年增多[1]。胶原三股螺旋重叠蛋白1(collagen triple helix repeat containing 1，CTHRC1)是1种外分泌糖蛋白[2]，在多种实体肿瘤中高表达，CTHRC1基因通过调控MMP-7/MMP-9通路促进肿瘤细胞浸润和扩散[3]。而程序性死亡受体-配体(programmed cell death ligand 1，PD-L1)是重要的免疫检查点蛋白，通过与PD-1结合抑制T细胞功能促进肿瘤免疫逃逸的发生[4]，PD-L1已被证实在多种肿瘤中表达增高，且常与患者预后不良相关[5]。CTHRC1、PD-L1均与恶性肿瘤的发生发展相关，但在PCa中作用尚不明确。本研究采用免疫组织化学法检测PCa患者组织中CTHRC1、PD-L1的表达情况，旨在为PCa的预后的评估提供参考价值。

1 材料与方法

1.1 研究对象

选取2013年1月至2017年1月于本院泌尿外科行根治性前列腺切除术的86例患者，患者年龄49～81岁，平均年龄(67±9.14)岁。所有患者病理学检查均确诊为前列腺癌，TNM分期组遵循美国癌症联合会(AJCC)分类；所有患者入组前均未行放、化疗，靶向药物治疗及生物免疫治疗；患者身体状况良好，无手术禁忌症。术中采集患者肿瘤组织及癌旁正常组织保存于-80 ℃备用，所有患者均签署研究的知情同意书，本研究经医院医学伦理委员会审核通过。

1.2 免疫组织化学法检测CTHRC1、PD-L1蛋白表达

将玻片脱蜡水化，使用磷酸缓冲液(PBS)冲洗后滴加3%H2O2孵育10 min，使用EDTA(pH8.0)和柠檬酸钠溶液对抗原进行高压热修复，PBS冲洗后滴加山羊血清室温下封闭30 min，滴加50 μl一抗置于湿盒内4 ℃孵育过夜。次日在室温复温1 h，PBS冲洗3次后滴加50 μl二抗，室温静置1 h。……