王元媛 李 潇 苏 佳

宫颈癌是常见的妇科恶性肿瘤，目前常采用手术、放化疗等方法，术前化疗可减小病灶提高手术切除率和降低术中转移机风险[1-2]。由于大多数患者一旦确诊就已处于宫颈浸润癌阶段，甚至严重转移，导致手术切除难度大，术后复发率较高等，从而降低术后治疗效果。因此手术过程中对患者治疗效果进行评估，可有效指导医师重点关注低治疗效率患者，及时调整治疗方案，从而改善生活质量和加快预后[3-4]。超声造影(Contrast-enhanced Ultra sonogra-phy，CEUS)可检测肿瘤血管形态及血流动力学状态，同时还能提供治疗前后肿瘤病灶微循环变化情况，反应疾病进展[5]。人G补缀FHA域血管生成因子1(angiogenic factor with G and FHA domains 1,AGGF1)具有强烈的血管生成促进功能，通过诱导持续性血管生成从而促进宫颈癌细胞的生长、侵袭以及转移，而hPygo2可由人乳头瘤病毒诱导从而在组织中高表达，通过调控细胞周期的变化引起癌细胞异常增殖，进而导致宫颈癌组织向周围组织浸润，两种因子均在宫颈癌组织中高表达，协同调控肿瘤的生长、分化、侵袭、转移，从而降低手术治疗效果[6-7]。AGGF1与血管状态密切关联，而CEUS直接检测肿瘤血管灌注状态，故而推测两者之间存在相关性。因此在手术治疗过程中检测宫颈癌组织中的表达情况至关重要，同时配合使用CEUS评估肿瘤血管状态，可从分子学、影像学角度进一步评估宫颈癌组织的分化、生长状态，从而反应术后效果，因此本文将通过实例进一步探讨。

1 资料与方法

1.1 基本资料

选取我院于2017年6月起至2019年12月126例行手术治疗的老年宫颈癌患者作为研究对象，根据患者术后疗效分为有效组(84例)和无效组(42例)，年龄56～71岁。所有患者均签署知情同意书，本研究获得我院伦理委员会批准。纳入标准：(1)经病理学、影像学检测确诊为宫颈癌，根据2006年修订国际妇产科联盟 (FIGO) 临床分期为ⅠB～Ⅱ期[8]；(2)均为初治患者，未接收化疗、手术治疗，预计生存期超过6个月。排除标准：(1)心、肾、肝等重要脏器功能障碍或造血系统疾病者；(2)存在其他原发性恶性肿瘤，或者肿瘤转移者；(3)手术不耐受，应从性较差。

1.2 方法及判断标准

所有患者术前1周采用CEUS检查，首先用5 ml生理盐水溶解声诺维微泡造影剂干粉(Bracco SonoVue)，混匀即可，肘部静脉注射2.4 ml造影剂后立即用5 ml生理盐水冲洗管道。采用超声仪(厂家：美国GE公司的volusonE8)行阴道超声检查，观察宫颈癌患者病灶位置、大小、血流、回声等情况。经肘静脉团注造影剂2.4 ml，及时启动计时器、动态存储，观察造影过程5 min，并连续记录储存所有图像资料。

使用时间-强度分析软件对病灶进行定量分析，得到宫颈癌各区域的时间-强度曲线的量化参数，主要为造影剂到达时间 (arriving time,AT)、达峰时间 (time to peak,TTP)、峰值强度 (peak intensity,PI)，平行测量3次，取平均值。

收集手术切除的宫颈癌组织并进行石蜡包埋。随后依次连续切片、低温烤干后保存于-20℃冰箱，采用辣根-过氧化酶连接二步法对颈癌组织中hPygo2、AGGF1表达水平进行免疫组化法检测。兔抗人Pygopus2单克隆抗体，购自美国Abcam公司，抗-AGGF1一抗购自美国Santa Cruz公司，免疫组化染色步骤按试剂盒说明书开展。采用双盲法阅片，正置显微镜购自于日本Olympus公司，细胞中着色点位于细胞核，出现绿色荧光为AGGF1表达阳性细胞，若呈现棕黄色颗粒为hPygo2表达阳性细胞。

每张病理切片中选择3～5个代表性的高倍视野采集图像，根据阳性细胞数占比以及染色强度进行判断。阳性细胞染色强度：强染色(3分)、中染色(2分)、弱染色(1分)、无染色(0分)。阳性细胞率：51%～100%(4分)、26%～50%(3分)、10%～25%(2分)、0～9%(1分)。

疗效评定标准[9]：根据RECIST实体肿瘤化疗疗效评定标准并采用超声造影检查、妇科检查结果进行判定，若肿瘤治疗后完全缓解、部分缓解则判定为有效，若病变进展、病变稳定则判定为无效。

1.3 统计学分析

应用SPSS 19.0软件进行统计学分析，计量资料用表示，组间比较采用独立样本t检验，计数资料采用百分比表示，组间比较采用χ2检验；对术后疗效影响因素进行单因素分析，并采用非条件Logistic回归进行多因素分析，相关性评估采用Spearman相关性分析，P<0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 造影结果

有效组患者术前AT、TTP显著高于无效组，而PI显著低于无效组 (P<0.05)，见表1。

表1 术前造影结果

2.2 组织hPygo2、AGGF1表达水平

有效组患者宫颈癌组织中的hPygo2、AGGF1表达水平显著高于无效组，差异具有统计学意义(P<0.05)，见表2、表3。

表2 宫颈癌组织中hPygo2表达水平

表3 宫颈癌组织中AGGF1表达水平

2.3 术后疗效与临床病理特征的关系

两组患者年龄、吸烟史、癌症类型、癌症分期、高血压、高血脂等一般资料差异无显著性(P>0.05)，而有效组患者的肿瘤显著小于无效组(P<0.05)，见表4。

表4 术后疗效与临床病理特征的关系

2.4 宫颈癌患者术后疗效影响因素的Logistic回归分析

经对患者的肿瘤大小、组织hPygo2和AGGF1表达水平以及影像结果进行回归多因素分析，结果显示均与术后疗效存在密切相关性(P<0.05)，见表5。

表5 患者术后疗效影响因素多因素分析结果

2.5 组织hPygo2和AGGF1表达水平以及影像参数的相关性

本次研究结果显示：组织hPygo2和AGGF1表达水平、AT、TTP两两之间存在显著正相关性，均与PI呈现负相关，见表6。

表6 组织hPygo2和AGGF1表达水平以及影像参数的相关性(γ，P)

3 讨论

宫颈癌是妇科肿瘤中是仅次于乳腺癌的第二大肿瘤，早期症状不显著，若诊断治疗不及时，则易过渡到进展期宫颈浸润癌阶段，使得术后仍然需要开展化疗、放疗，以增强疗效[4]。目前手术治疗是唯一可能治愈宫颈癌的方法，同时在治疗围术期配合使用化疗、放疗，可有效杀灭癌细胞[10]。研究发现肿瘤的血流灌注变化可作为疗效的重要参考指标，采用CEUS技术评估患者宫颈癌组织血流动力学状态和血管形态可反应肿瘤的生长状态，评估术后化疗药物灌注效率，从而评估治疗效果。hPygo2作为癌细胞生长、发育的重要的核蛋白，其通过在肿瘤细胞中高表达，从而调控染色质重塑、转录激活等生物学功能，进而促进宫颈癌细胞增殖和肿瘤组织生长发育[11]。AGGF1则在肿瘤血管内皮细胞中高表达，从而推动血管新生，可为恶性增殖的肿瘤细胞提供充足的营养和氧气，促进代谢废物的排泄，与宫颈癌的生长、侵袭、转移等密切关联[12]。因此hPygo2、AGGF1表达水平均有肿瘤宫颈病变程度和进展密切关联，配合超声造影及时准确地反映肿瘤血管血流状态，从而可为临床提供有效的疗效评价依据。

本次研究结果显示有效组患者的宫颈癌组织中的hPygo2、AGGF1表达水平显著高于无效组(P<0.05)，分析认为高hPygo2、AGGF1表达患者其疾病处于高度分化状态，疾病处于更为严重程度的状态，其中hPygo2可促进细胞由G1期向S期转化，加快细胞周期进程，从而促进癌细胞增殖[6]，而癌细胞的大量增殖需消耗大量的营养和产生大量的废物，AGGF1则通过诱发肿瘤血管生成，改善局部缺血状态，为肿瘤细胞的异常增殖提供良好的生长、侵袭条件[13]，故而两种蛋白因子协同促进肿瘤的生长，从而增加手术切除和术后放疗难度，降低治疗效果。有效组患者术前AT、TTP显著高于无效组，而PI显著低于无效组，分析认为有效组患者肿瘤处于高度分化状态，高表达的AGGF1导致大量新生血管的生成，而新生血管的大量交通支、动静脉瘘使血流阻力降低，从而引起增加灌注速度和灌注量[14]，故而缩短病灶造影剂AT、TTP，以及增加病灶造影剂PI。同时通过对宫颈癌组织hPygo2、AGGF1表达水平、临床病理特征以及超声造影结果进行进行单因素、多因素分析发现结宫颈癌组织hPygo2、AGGF1表达水平、超声造影结果与患者术后疗效均有显著相关性。即宫颈癌组织中高hPygo2、AGGF1表达水平、超声造影结果显示肿瘤血管状态更佳，则手术治疗效果越差。hPygo2促进肿瘤细胞的生长、增殖、分化，同时AGGF1通过增加血管密度和加快局部血流速度，从而为肿瘤细胞提供良好的生长环境，进而使得宫颈癌组织进一步扩散，增加肿瘤大小和诱导肿瘤高度分化等，而超声影像结果则是显示肿瘤血管的实际新生状态，可提供肿瘤内微循环的变化情况，如治疗无效组患者会因为新生血管持续、大量生成，从而导致灌注速度快，病灶造影剂PI高[15]，因此证实超声造影、hPygo2和AGGF1水平检测可有效评价老年宫颈癌患者术后疗效。

宫颈癌的发生发展受到多因素的影响，且病情发展迅速、突变因素多，其中参与血管新生、细胞生长分化的因子是发病的诱发因素，超声影像结果评估肿瘤生长状态，反映治疗难度，通过了解各指标之间的相关性可为临床治疗提供思路。本次研究结果显示组织hPygo2和AGGF1表达水平、AT、TTP两两之间存在显著正相关性，均与PI呈现负相关，证实各个信号通路、影像参数之间对于疗效的影响并不是孤立存在的，分子学水平的变化从内在调控肿瘤的生长，影像学参数和图像则更为直观的反应分子学水平引起的变化，从而有效评估术后疗效，指导临床治疗，故而推测超声造影联合hPygo2和AGGF1水平检测可有效评价老年宫颈癌患者术后疗效。当然，此次研究还存在一定局限性，本研究没有进行长期的随访观察，因此未能长期关注宫颈癌患者治疗后的hPygo2和AGGF1水平变化趋势及规律，同时仍需要扩大样本量进行综合分析，从而为评估和预测宫颈癌的预后和长期生存率方面提供有价值的线索。

综上所述，hPygo2、AGGF1在宫颈癌组织高表达水平，而超声造影可有效反应肿瘤血流灌注状态。三者之间存在显著相关性，联合检测可有效反应术后疗效。