李新颖，于星辰，张 舜，王爱国，刘 莉△

华中科技大学同济医学院公共卫生学院 1流行病与卫生统计学系 2劳动卫生与环境卫生学系环境与健康教育部重点实验室，武汉 430030

氟是人体生长发育必需的微量元素，一定剂量的氟摄入可维持机体正常生理活动。

研究表明，过量氟暴露可引起运动协调、认知和记忆能力的下降，提示过量的氟摄入可能影响神经行为和功能[1-2]。神经系统是机体氧耗量最高的系统，而线粒体是细胞供能的主要场所[3]，因此研究氟中毒致神经细胞线粒体改变具有重要意义。线粒体呼吸链能够产生活性氧(reactive oxygen species，ROS)，过量的ROS若未被及时清除，会导致线粒体能量代谢衰竭和氧化应激[4]。而氟则可能通过诱导ROS的产生，损伤线粒体相关成分从而产生毒性效应。

现已有研究报道氟对神经细胞线粒体相关基因表达的影响[5-6]，而氟对神经细胞线粒体功能、线粒体动力学和自噬相关蛋白表达的影响鲜见报道。本实验通过研究氟对人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y细胞)线粒体功能、线粒体动力学和自噬相关蛋白表达及细胞凋亡的影响，对氟中毒致神经系统损伤的机制进行探讨。

1 材料和方法

1.1 主要仪器和试剂

凝胶成像系统(ChemiDocTMXRS+，Bio-Rad，上海)；流式细胞仪(CytoFLEX S，Beckman Coulter，美国)；全功能微孔板检测仪(PerkinElmer/envision，上海)；荧光显微镜(BX53，Olympux，日本)。NaF(Sigma，美国)；Miro1/RHOT1抗体(Invitrogen，美国)；MitoSOX Red检测试剂盒(Invitrogen，美国)；ATG5抗体(Invitrogen，美国)；PINK1抗体(Invitrogen，美国)；PARP抗体(Invitrogen，美国)；cleaved Caspase-3抗体(Affinity Biosciences，美国)；Bcl-2抗体(Affinity Biosciences，美国)；GAPDH抗体(普健生物，武汉)；凋亡检测试剂盒(Vazyme Biotech，南京)；线粒体跨膜电位检测试剂盒(JC-1)(Solarbio，北京)；……