吴潇芸,郑盛锋,张明津,付伟金△

1广西卫生职业技术学院(广西南宁 530023)；2广西医科大学第一附属医院泌尿外科(广西南宁 530022)

华蟾素(bufalin)是传统中药蟾蜍皮肤中提取的有效成分，是一种类地高辛类物质[1]。研究证实华蟾素可促进胃癌、肝癌、结肠癌等多种肿瘤细胞凋亡，抑制细胞增殖及细胞侵袭性，发挥抗肿瘤活性[2-4]。近年发现华蟾素不仅抑制泌尿系肿瘤中如膀胱癌、前列腺癌细胞增殖[5-6]，还可抑制肾癌细胞增殖和侵袭[7]，但具体机制仍有待进一步研究。Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路已被证实与肿瘤细胞的增殖和侵袭密切相关。Gai等[8]证实华蟾素可下调Wnt/β-catenin通路相关蛋白表达，从而抑制肝癌细胞侵袭和迁移。目前不清楚华蟾素抑制肾癌细胞增殖和侵袭，是否与调控Wnt /β-catenin信号通路相关蛋白表达有关。本研究开展于2019年1—12月，拟探讨华蟾素抑制肾癌细胞侵袭和增殖可能相关机制。

1 材料与方法

1.1 材料 人肾癌细胞786-0购自上海中国科学院细胞库；华蟾素购自美国Invitrogen公司，RPMI 1640 细胞培养液、10%胎牛血清购自杭州四季青公司；单克隆抗体Wnt购自美国cell signaling公司；β-catenin(ab32572)，E-cadherin(ab1416)，N-cadherin(ab76011)，Vimentin(ab92547)，内参GAPDH购自英国Abcam公司；流式细胞试剂盒，CCK-8试剂盒购自美国Sigma公司。

1.2 细胞培养 肾癌786-0细胞在5%CO2、37℃培养箱中，RPMI1640培养液中培养，将处于对数生长期的肾癌细胞用于实验，华蟾素组添加华蟾素；对照组添加等量的PBS。本细胞实验经广西医科大学第一附属医院伦理委员会批准(伦理号：2017-KY-102)。

1.3 细胞增殖实验 取处于对数生长期的肾癌细胞，调整浓度为5×103·mL-1，置于96孔板培养，用不同……