张春阳 李亮 张宁坤

海水淹溺可导致肺组织损伤，严重者出现急性呼吸窘迫综合征(acute respiratory distress syndrome,ARDS)，死亡率高。传统的治疗方法，如常规机械通气、高压氧等，不能有效的促进局部损伤细胞修复、阻止ARDS的病理进程，未从根本上解决肺泡/毛细血管膜受损的问题[1-2]。有研究发现，部分液体通气可减轻ARDS所导致的肺泡萎陷，同时作为液体通气的介质-全氟化碳(perfluorocarbon，PFC)具有降低炎症反应的作用[3]。而间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)具有修复损伤、自动归巢、免疫调节的作用，有可能针对肺泡/毛细血管膜受损，减轻海水淹溺导致的肺损伤[2]。目前国内外尚无将两者联合，用于海水淹溺导致的肺损伤及急性呼吸窘迫综合征治疗的研究报道。因此，本研究拟通过气管内植入脐带来源的间充质干细胞联合部分液体通气，观察对海水淹溺致大鼠肺损伤的治疗效果，以探索新的救治手段。

资料与方法

一、主要试剂及材料

DMEM/F12(dulbecco’s modified Eagle’s medium/F12)培养基(美国Hyclone公司)；胰蛋白酶(Trypsin)(美 国Invitrogen公司)；胎牛血清(fetal bovine serum，FBS)(美国 Gibco 公司)；全氟化碳(上海捷视医疗设备有限公司)；CM-Dil 细胞标记液(Molecular Probes,C7000)；肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor,TNF-α)、白介素-1β(Interleukin-1β, IL-1β)、白介素-6(Interleukin-6, IL-6)、白介素-10(Interleukin-10, IL-10)ELISA试剂盒(天津安诺瑞康生物技术有限公司，中国)。配置海水 参考前期研究[4]，采用海水配方，海水成分：NaCl 26.518 g/L, MgCl22.447 g/L, MgSO43.305 g/L, CaCl21.141g/L, KCl 0.725 g/L，NaHCO30.202 g/L, NaBr 0.083 g/L, 渗透压浓度 1250～1350 mmol/L, PH 8.2, 比重 1.05～1.06。SPF级健康雌性SD大鼠(北京科宇动物养殖中心)，鼠龄(2.5±0.5)月，体重(300±30)g,许可证号：SCXK(京)2018-0010。

二、方法

1. 间充质干细胞分离、培养、传代及荧光标记: 经伦理委员会批准(NO.HZKY-PJ-2015-1)，签订知情同意书后，无菌条件下留取脐带组织。参考既往研究[5]，采用组织块贴壁法，分离、培养脐带华通胶间充质干细胞，已对其分化及免疫表型进行检测，符合MSCs标准。……