邓 斐，祁 贤，余慧燕，王慎骄，许 可，黄昊頔，鲍倡俊

0 引 言

甲型流感病毒属于正粘病毒科，能够感染人、禽和多种哺乳动物。血凝素(hemagglutinin，HA)和神经氨酸酶(neuraminidase，NA)是甲型流感病毒血清分型的靶标蛋白，目前已经在雁形目和鸻形目等野生水禽中发现了16种HA亚型和9种NA亚型，此外，在蝙蝠中发现了两种新的H17N10和H18N11亚型[1-4]。1966年首次在北美发现H9N2亚型禽流感病毒(avian influenza virus, AIV)，目前已呈全球流行[5-6]。1994年在我国广东暴发疫病的家禽中分离到多株H9N2 AIV[7]，之后数年间该病毒传播到全国大部分地区，成为中国家禽中一个重要的禽流感病毒流行亚型[6-8]。

自1998年以来，不断报道人感染H9N2禽流感病毒的病例。目前，与H5Ny(y=1、6) 和H7Ny(y=2、3、7、9)一起，H9N2禽流感病毒成为危害动物和人类健康的重要病原体，对公共卫生的负面影响不容忽视[9-10]。本研究将对江苏省首例人感染H9N2禽流感病例进行分子溯源研究。

1 资料与方法

1.1 研究对象选取2019年3月18日江苏省疾病预防控制中心1份禽流感病毒感染患者(男，9岁)的咽拭子标本及从患者住处附近的农贸市场采集禽类和外环境样本共40份。采集患者咽拭子进行核酸检测和病毒分离。

1.2主要试剂和仪器流感病毒核酸分型检测试剂盒购于江苏硕士生物技术有限公司；QIAamp Viral RNA kit、QIAGEN购于公司；SuperScript© III First-Strand Synthesis System和 High Pure PCR Product Purification Kit购于 Invitrogen公司；Nextera XT DNA Sample Preparation Kit购于Illumina公司；Illumina MiSeq platform购于Illumina公司；荧光定量PCR仪VIIA7型购于ABI公司。

1.3流感病毒核酸分型检测采用荧光定量PCR法对标本进行流感病毒核酸分型检测，包括A型、B型、H1-H16、N1-N9。

1.4病毒分离和鉴定将患者咽拭子、环境和禽类标本接种9-11日龄的无特定病原体(specific pathogen-free，SPF)鸡胚，接种部分是尿囊腔，37 ℃条件下培养72 h。……