谢华斌 葛高顺 王莹莹 方宜臻 马芳芳 倪二茹,3

(1 厦门大学附属心血管病医院检验科，福建省厦门市 361008，电子邮箱：xmsccl@126.com；2 厦门市心血管疾病精准医学重点实验室，福建省厦门市 361008；3 厦门大学医学院，福建省厦门市 361000)

先天性心脏病(congenital heart disease,CHD)是一种最常见的出生缺陷性疾病，其中80%为单纯性CHD，即仅有心脏的发育畸形或缺陷，而没有其他部位的发育异常[1-3]。目前已经发现多个可能与CHD发病有关的基因，其中NK2同源异型框5(NK2 homeobox 5,NKX2-5)、GATA结合蛋白4(GATA binding protein 4,GATA4)和T盒转录因子5(T-box transcription factor 5,TBX5)是心脏早期发育过程中的3个重要转录因子。有研究提示，这3个基因参与室间隔缺损和房间隔缺损的发生和发展[4]，且三者相互作用，共同调控心脏特异基因的表达[5-7]。其中，NKX2-5的基因突变可引起房室传导缺陷和房间隔缺损，可导致左心发育不良综合征、右室双出口和法洛四联症等多种不同类型的CHD[4-7]。最近研究还有表明CHD的发生与NKX2-5基因的63位碱基的A突变为G有关[8]，但其具体机制尚未明确。本研究探讨NKX2-5基因63A>G突变对CHD相关基因表达水平的影响，为阐明NKX2-5基因与CHD发病的关系提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 材料 P19细胞和HEK293T细胞(美国菌种保藏中心，ATCC)；PLVX-puro-MCS-GFP质粒(美国Addgene公司，批号：128652)；psPAX2质粒(美国Addgene公司，批号：12260)和pMD2G质粒(美国Addgene公司，批号：12259)；DH5α感受态细胞(天根生物公司，批号：CB101-02)；BamHⅠ限制性内切酶(美国Thermo公司，批号：FD0054)和EcoRⅠ限制性内切酶(美国Thermo公司，批号：FD0274)；NKX2-5 cDNA(Sino Biological公司，批号：HG12354-ANG)；T4连接酶(美国Thermo公司，批号：15224017)；杜氏改良伊格尔培养基(Dulbecco′s modified Eagle medium，DMEM；美国Gibco公司，批号：11965092)；点突变试剂盒(碧云天公司，批号：D0208S)；琼脂糖(北京索莱宝生物公司，批号：9012-36-6)；Turbofect转染试剂(美国Thermo公司，批号：R0534)；聚……