王会含，王永堂，苗建华，李凤新

(郑州大学附属郑州中心医院，河南 郑州 450007)

骨关节炎(osteoarthritis，OA)多发于老年人，临床主要病理表现为关节软骨退变和关节边缘骨质增生[1-2]。随着人们预期寿命的延长，OA的发病率逐年上升，而其发病机制目前尚未明确。研究发现，软骨细胞凋亡在OA的发生过程中起重要作用，阻止或减缓软骨细胞凋亡是防治OA的关键[3-4]。近年来，临床多采用以活血和补肝益肾为主的中药防治OA，川芎是常用药物之一[5-6]。川芎嗪是从川芎中分离的一种生物碱，朱海泉等[7]研究表明其能够有效预防OA。为了探索川芎嗪对OA软骨细胞凋亡的影响及其作用机制，我们开展了相关的实验研究，现总结报告如下。

1 材料与仪器

1.1 实验材料膝关节软骨组织来自在郑州大学附属郑州中心医院接受膝关节置换的患者。试验方案经医院医学伦理委员会审查通过。

1.2 实验试剂Hank’s平衡盐溶液(Hank’s balanced salt solution，HBSS)购自武汉益普生物科技有限公司，Ⅱ型胶原酶、多聚甲醛溶液、二甲亚砜(美国Sigma公司)，DMEM培养基(美国HyClone公司)，10%的胎牛血清、苯基甲磺酰氟(phenylmethanesulfonyl fluoride，PMSF)购自北京孚博生物科技有限公司，甲苯胺蓝(北京索莱宝科技有限公司)，鼠抗人Ⅱ型胶原蛋白一抗(美国Santa Cruz公司)，生物素标记的山羊抗兔免疫球蛋白(immunoglobulin，Ig)G二抗(美国Biotium公司)，肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor，TNF)-α(福州迈新生物技术开发有限公司)，川芎嗪(纯度≥98%，成都德思特生物技术有限公司)，异硫氰酸荧光素标记的膜联蛋白V(annexin V-fluorescein isothiocyanate，Annexin V-FIIC)/碘化丙啶(propidium iodide，PI)双染色试剂盒、Promega逆转录试剂盒(江苏凯基生物技术股份有限公……