安 敏，王帅道，袁东烨，何靓男

(电子科技大学医学院附属绵阳医院·绵阳市中心医院烧伤整形外科，四川 绵阳 621000)

虎杖苷是植物虎杖的提取物，主要作用包括镇咳、去痰、平喘、抗菌、清除自由基、调节血脂和降低胆固醇等[1-2]。本研究探讨了虎杖苷通过SPOCK2表达对新生小鼠高氧肺损伤的保护作用，现报告如下。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 仪器：SCR20B型冷冻离心机(日本HITACHI公司)；Mx3000P型Real time PCR仪器(美国Agilent公司)；DF-23B型凝胶扫描系统(英国UVP公司)；ABI9700型PCR扩增仪(美国ABI公司)；UV-1206型分光光度计(日本SHIMODZU公司)；GDS7600型水平式电泳仪(北京东方仪器厂)。

1.1.2 药品：虎杖苷购自南京泽朗医药科技有限公司，用DMSO溶液充分溶解，再稀释成所需的浓度。

1.1.3 试剂：小鼠正常肺上皮细胞mlE-12(美国ATCC公司)；RPMI-1640培养基、胎牛血清购自美国Sigma公司；丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒购自南京建成生物工程研究所；酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)试剂盒购自上海酶联生物科技有限公司；RIPA蛋白裂解液、二辛可宁酸(bicinchoninic acid，BCA)试剂盒购自上海碧云天生物科技研究所；实时荧光定量聚合酶链反应(polymerase chain reaction，PCR)试剂盒购自大连宝生物科技有限公司。

1.2 方法

1.2.1 细胞处理与分组：用含10%胎牛血清的RPMI-1640培养基培养小鼠正常肺上皮细胞mlE-12，置于37 ℃、5%CO2的恒温培养箱中，当细胞生长融合至80%～90%时，用传代细胞进行后续实验。正常培养的mlE-12细胞作为对照组；利用高氧刺激mlE-12细胞作为高氧组。用50、100和150 μmol/ml虎杖苷处理mlE-12细胞，再用高氧刺激，作为高氧+低剂量组、高氧+中剂量组和高氧+高剂量组。将pcDNA、pcDNA-SPOCK2转染至mlE-12细胞，再用高氧刺激细胞，作为高氧+pcDNA组、高氧+pcDNA-SPOCK2组。将si-NC、si-SPOCK2转染至mlE-12细胞，高氧刺激后，再用高剂量(150 μmol/ml)虎杖苷处理细胞，作为高氧+高剂量+si-NC组、高氧+高剂量+si-SPOCK2组。……