李腾宇 张 霞 于肖鹏 李晓光 王西冉 王延秀 刘焕燕

泰安市中心医院1.口腔科；2.疼痛科，山东泰安 271000

口腔鳞癌（oral squamous cell carcinoma，OSCC）严重影响和威胁人类的健康和生命，其生长需有新生的血管提供营养，而血管的生成则需要多种因素的参与［1］。凋亡抑制因子生存素（Survivin）与肿瘤转移、增殖关系密切，几乎表达于人类所有肿瘤组织［2］，促进肿瘤耐药和血管生成［3-4］。本研究采用免疫组化方法，检测OSCC 组织Survivin、环氧化酶-2（cyclooxygenase-2，COX-2）、血管内皮生长因子（vascular endothelial cell growth factor，VEGF）的表达情况，测定其微血管密度值（microvascular density，MVD），探讨 Survivin 与 COX-2、VEGF 及OSCC 血管生成的关系。

1 材料和方法

1.1 临床资料及切片制备

OSCC 标本共 106 例，来自 2007 至 2017 年我院颌面外科病房手术切除组织，患者年龄34～78 岁，平均（60.6 ± 7.5）岁，其中女性患者41 例，男性患者65 例。根据术后病理检查诊断的结果，判断颌颈部的淋巴结有无出现转移。选取的106 例病例手术前均未进行化学治疗或放射治疗，临床分期按照TNM 国际统一分期方法（UICC）分组，其中Ⅰ期 14 例，Ⅱ期 29 例，Ⅲ期 38 例，Ⅳ期 25 例；组织病理学分级为：1 级 33 例，2 级 51 例，3 级 22 例；具体肿瘤部位为：舌癌 41 例，牙龈癌 30 例，颊癌 13 例，硬腭癌8 例，口底癌14 例。一抗为抗Survivin、COX-2、VEGF、CD34 单克隆抗体，切片进行免疫组化染色及HE染色。

1.2 免疫组织化学染色

DAB 试剂由 Sigma 公司提供，Survivin、COX-2、VEGF、CD34 单克隆抗体由博士德公司（武汉）提供。SABC免疫组化操作方法按照说明书进行。用已经过检测明确的Survivin、VEGF、COX-2、CD34为阳性的乳腺癌切片作为阳性对照。一抗用PBS 替代作为阴性对照，DAB显色，苏木精复染。

1.3 Survivin、COX-2、VEGF的判断标准

癌细胞的细胞质内含有棕褐色颗粒即视为阳性染色。每张切片有10%以上的癌细胞表现为弱、中等强度着色［5］，即判断为染色阳性，否则判为染色阴性。……