崔 珂 孔亚茹 马传敏 张振杰 史卫峰 全传松

山东第一医科大学（山东省医学科学院）基础医学院病原生物学系，山东济南 250014

肠道病毒71 型（enterovirus 71，EV71）属于小RNA 病毒科（Picornaviridae）肠道病毒属。EV71 主要感染5 岁以下儿童，是导致重症手足口病（hand，foot and mouth disease）最常见的病毒类型之一［1］。手足口病患者在临床上表现为手、足、口部疱疹，咽峡炎等症状；少数重症患者甚至出现心肌炎、脑膜炎或弛缓性麻痹等多种并发症［2］。根据法定传染病报告显示，2020 年中国大陆共报告手足口病761 355 例，死亡3人，发病率为54.233 6/10万［3］。该病毒持续引起国内外公共卫生领域的广泛关注，然而其防治仍未取得重要进展［4］。

肠道病毒71 型可编码VP1 ～VP4 4 种结构蛋白和7种非结构蛋白［5-6］，其中VP1 ～ VP3位于病毒衣壳表面。目前已证实VP1 的线性表位免疫原性较强，可有效刺激机体产生中和抗体［7-8］。在病毒感染过程中，机体通过体液免疫来阻止病毒的传播，这在抗EV71 感染过程中发挥重要作用［9］。本研究选取EV71 抗原性强的VP1 蛋白，将其基因克隆至原核表达载体pET-21a（+）中，利用IPTG 诱导VP1蛋白在大肠埃希菌中融合表达，以纯化的重组蛋白作为抗原，结合流式细胞术分选已免疫灭活病毒小鼠的B 淋巴细胞，这为筛选高效活性的抗EV71 抗体奠定了基础，为临床疾病的诊断和治疗提供了新思路。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

EV71 毒株KY315729、原核表达载体pET-21a（+）均由实验室保存；感受态细胞BL21-DE3购自北京康为世纪公司；质粒提取试剂盒购自天根公司；IPTG购自索莱宝生物科技有限公司；Superdex 75购自 GE 公司；6×His 抗体购自上海生工；GSSG 购自Amresco；……