郝萧 刁雪芹 鲁雯雯 张红 夏小叶

临床患者在输血前进行不规则抗体筛查试验，不规则抗体是引起临床配血不合的主要原因。对于不规则抗体筛查阳性患者，需进行进一步的抗体鉴定，确定抗体特异性，然后选择相应抗原阴性的献血者红细胞进行输注，保障临床输血安全。本实验室发现一例抗-E、抗-c联合抗-Wra抗体导致配血不合，现报道如下。

材料与方法

1 标本来源 患者何某，女，71岁，临床诊断T-细胞大颗粒淋巴细胞白血病，上呼吸道感染，重度贫血入院，Hb 24 g/L，既往有多次输血史，抗体筛查阳性，送我室进行配血。

2 仪器与试剂 抗-A、抗-B 血清（上海血液生物，批号：201809019）；ABO标准红细胞（上海血液生物，批号：20205313）；（IgG+IgM） 抗D（上海血液生物，批号：20191807）抗-C 、抗-c、抗-E、抗-e（上海血液生物，批号：20193001，20183102，20203201，20183302）；抗-Wra（Sanquin 批号：8000233510）；抗体筛选细胞（Sanquin 批号：8000450705）；抗体鉴定谱细胞（Sanquin 批号：8000450012）；抗人球蛋白试剂多抗（Sanquin 批号为8000226471）；Anti-IgG单抗（Sanquin批号为8000229804）；MC450全自动洗涤离心机（日本日立）；KUBOTA KA-2200离心机（日本久保田）；毛血管超速离心机（KUBOTA-322）；水浴箱JULAB-20B；BioVUE 孵育器和离心机。

3 试验方法 血型鉴定方法：用试管法；抗体筛查、抗体鉴定及抗体效价鉴定：用室温盐水试管立即离心 （NS法）及微柱凝胶卡式法（Gel）；木瓜酶法：抗体鉴定谱细胞与等体积配制好的木瓜酶37 ℃孵育15 min，生理盐水洗涤3次，离心取压积红细胞备用。处理完的细胞用直接抗人球实验做对照验证是否处理成功，如果直抗结果阳性，说明红细胞被致敏，需要重新配制。

毛细管离心法：取患者400 μL红细胞洗涤3次，取压积红细胞转入2支毛细管，底部用橡皮泥封堵后进行毛细管超速离心15 min（封闭端置于远心端），转速为10 000 r/min。分别取近心端、远心端红细胞配制成2%～5%红细胞悬液备用[1]。

结 果

1 患者血型 为A型，RhD（+），Wra抗原表型呈双群现象，Rh系统分型CcEe，其中c、E为混合视野2+mf。采用毛细管离心法后鉴定患者Wra（-），Rh系统分型为CCee。

2 直接抗人球蛋白试验 抗IgG+C 3d（多抗）：2+；抗-IgG：2+；抗-C3d：0。

3 抗体筛查 患者血清与2号筛选细胞盐水不反应，卡式与2号筛选细胞反应强度达2+，酶法与2号筛选细胞反应增强呈3+，与3号筛选细胞出现1+，抗体筛查结果见表1。结果显示，患者血清中存IgG类不规则抗体，酶法能增强反应强度。

表1 不规则抗体筛查结果

4 抗体鉴定 联合应用两个批次的谱细胞进行抗体鉴定，根据抗体鉴定结果，见表2，对照谱细胞格局分析，患者体内含有：抗-E、抗-c联合抗-Wra。

表2 谱细胞（8000450012）抗体鉴定结果

5 抗体效价测定 患者血清用谱细胞（8000450501）11号（E+，c-）卡式法测抗-E抗体的效价为3 2；谱细胞4号（E-，c+）卡式法测抗-c抗体的效价为2；用谱细胞（8000450012）5号（E-，c-，Wra+）卡式法测抗-Wra抗体的效价为16。

6 配血 连续两次从血库中筛选出E抗原、c抗原及Wra抗原阴性的献血者的红细胞共8 U，盐水和卡式配血主侧相合，无凝集无溶血。一周后再次挑选6 U 相应抗原阴性的红细胞。

7 随访 跟踪该患者，医院拿回8 U红细胞后分四次，每次间隔一天输注，第一次输注2 U后升至32 g/L，至第四次输注完隔天查血常规血红蛋白升至67 g/L。一周后再次输血6 U后血红蛋白升由67 g/L至99 g/L，输血效果良好，无溶血性输血反应。

讨 论

Rh血型系统是所有血型系统中最复杂的，最常见的五个抗原有C、c、D、E、e。Rh血型系统的抗体多由输血或妊娠免疫生成[2]，其临床意义仅次于ABO 血型系统，可能会造成严重的溶血性输血反应和新生儿溶血病。虽然输血技术在不断提高，但是不规则抗体漏检的情况还经常发生[3-5]，为提高临床输血的安全性，减少因抗体漏检导致的溶血性输血反应，该现象应该引起足够的重视。本患者采用常规方法检测发现抗-c抗体的格局没有完全显示出来，推测抗-c抗体较弱，进而我们采用经木瓜酶处理后的不规则筛查细胞与谱细胞加强试验进而鉴定抗-c抗体格局完全出来。提示我们当抗原抗体反应弱时可以通过酶处理细胞提高Rh系统抗体的检测[2]。

该患者Rh抗原分型c与E存在混合视野，患者存在输血史，考虑为之前输入了抗原c（+）、E（+） 的红细胞造成的混合视野，进而产生抗-E、抗-c抗体。经毛细管离心法对自身红细胞及输入的献血者的红细胞进行分离后鉴定患者Rh抗原分型为CCDee。对于近期输血的患者应采用毛细管超速离心法对患者红细胞及献血者的红细胞进行分离后鉴定患者的血型。Wra抗原的鉴定采用间接抗人球方法，由于患者直抗阳性，无法正确定型，经毛细管离心后，取患者红细胞做热放散致直抗阴性后，鉴定患者Wra抗原为阴性。

Wra是Diego血型系统的低频抗原，在中国人群中频率＜0.01%[6-7]。一些作者报道了在输过血的患者和孕妇的血清中抗-Wra的发生率较高，抗-Wra的发病率可能在免疫系统变得活跃时增加[8，9]。该患者为IgG型抗-Wra。鉴于该抗体在溶血性贫血患者体内的高发频率，为了保障输血安全，建议增加抗-Wra鉴定。本实验用了两套谱细胞进行鉴定，16个谱细胞（8000450501）凝集强度有格局，除了16号鉴定细胞反应强度外其他的均符合抗-E和抗-c的格局，抗-c反应强度弱阳性，但是16号细胞（E-，c+）反应强度达2+，显示还存在除了抗-c抗体以外其他的抗体，符合该特征的只有抗-Wra抗体。进一步用批号为8000450012的16个谱细胞进行鉴定，该批次的细胞中5号谱细胞抗原表型为E（-），c（-），Wra（+），该细胞的凝集强度达2+，说明患者确实存在抗-Wra抗体。鉴于该抗体在多次输血的溶血性贫血患者体内高发，为了保障输血安全，建议临床输血检验人员在不规则抗体鉴定时增加抗-Wra鉴定。避免抗体漏检要做到检测时，使用多种试验方法与试剂相结合，不同试剂与试验方法的灵敏度各异，是减少抗体漏检的有效途径。

利益冲突所有作者均声明不存在利益冲突