万菁，陈红，奚经巧，郭跃丽

原发性肾病综合征（PNS）是一种肾小球基底膜通透性增高的慢性肾病，其在儿童和成人中都很常见[1]。PNS 的病因尚未被完全阐明。肾活检是判断病理类型和预后的“金标准”，但它是一种有创操作，具有潜在风险。目前，尚缺乏理想的生物标志物用于PNS的诊断、激素治疗效果和预后预测[2]。miRNA 作为疾病的新分子标志物得到广泛关注，但其在PNS的应用研究仍处于起步阶段[3]。本研究拟探索血清miR-30a-5p表达与PNS患者临床特征、激素治疗效果的相关性，报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2019 年2―11 月于浙江中医药大学附属温州中医院肾脏病科就诊的160 例特发性PNS 患者作为试验组。采用1︰1 匹配法另选同期来本院体检的健康者160 例作为对照组。本研究的实施已获得本院伦理委员会的批准。

1.2 纳入与排除标准 纳入标准：（1）符合PNS的诊断标准[4]；（2）年龄18～65岁；（3）血清肌酐（Scr）＜176.8 mmol/L。排除标准：（1）继发性和遗传性肾病；（2）合并严重的心、脑、肝等疾病；（3）妊娠期、吸吮期妇女；（4）有精神异常，不配合治疗。

1.3 治疗方法 PNS 患者都接受激素治疗和辅助治疗（包括环磷酰胺、环孢素或霉酚酸酯）。患者均予足量泼尼松（按照体质量剂量，1.0mg·kg－1·d－1）治疗，连续口服8 周，部分患者可根据病理类型延长至12 周。按照疗效分为激素抵抗肾病综合征（SRNS）组（治疗至少12周后蛋白尿仍＞3.5 g/d或尿蛋白较基础值下降＜50%，血浆白蛋白＜30 g/L）和非SRNS 组[包括完全缓解（尿蛋白＜0.2g/d，血浆白蛋白＞35g/L）和部分缓解（尿蛋白0.2 ～2.0g/d 或尿蛋白0.2 ～3.5 g/d 尿蛋白较基础值下降＞50%）]。

1.4 观察指标 比较两组性别，年龄，吸烟、饮酒情况，体质量指数（BMI），糖尿病史，空腹血糖，血脂，Scr，肝肾功能，血尿素氮（BUN），24 h尿蛋白定量，血清和尿液miR-30a-5p 表达水平等。

1.4.1 实验室测量 采集受试者清晨空腹肘部静脉血3 ml，采用气相色谱-丙基乙二胺薄层色谱定Scr，溴甲酚绿法测定血清白蛋白、肝肾功能、血脂，采用全自动生化分析仪（型号：7600，采用日立公司）检测尿蛋白和24 h 蛋白排泄水平。1.4.2 血清miR-30a-5p 表达水平

1.4.2.1 血清RNA 提取 常温下解冻样本，取血清样本100 l 按Trizol 试剂（美国Invitmgen）和miRNeasy mini kit（美国QIAGEN 公司）说明书提取总RNA。外光分光光度计（NanoDrop 2000）鉴定血浆总RNA 浓度和纯度，变性凝胶电泳法检测RNA 完整性，放入－80℃低温冰箱留存待用。

1.4.2.2 miR-30a-5p 检测 使用 mi-ScriptⅡ反转录试剂盒将1 g RNA反转录为cDNA，采用miScript SYBR Green PCR 试剂盒，以U6 为RNA 内参，采用qPCR 检测血清miR-30a-5p 表达水平，反应条件参照试剂盒说明书设置。m iR-3 0 a-5 p：5’-G A A G G U C AGCUCCUACAAAUGU-3’，72 bp；U6：5’-ACGCAAATTCGTGAAGCGTT-3’，94 bp。miR-30a-5p 相对表达水平采用2－△△Ct法计算，实验重复3 次。

1.5 随访 所有患者均随访1 年，每月随访1 次。收集PNS 患者的临床信息，包括治疗状态、临床症状、并发症、BMI、血压、肝肾功能、血脂、血尿、24 h尿蛋白定量及miR-30a-5p 表达。

1.6 统计方法 采用SPSS 20.0 统计软件进行分析，计量资料以均数±标准差表示，采用 检验；计数资料比较采用2检验；危险因素分析采用多因素Logistic回归分析；受试者工作特征（ROC）曲线分析miR-30a-5p 的诊断价值。P ＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组基线资料比较 两组性别比、年龄、饮酒例数、糖尿病史、空腹血糖及高密度脂蛋白（HDL）等指标差异均无统计学意义（均P ＞0.05）。病例组吸烟例数、BMI、总胆固醇（TC）、三酰甘油（TG）、低密度脂蛋白（LDL）、-2MG、BUN 及Scr 均高于对照组（均P ＜0.05）。病例组血清miR-30a-5p 的表达水平高于对照组（P ＜0.05），两组尿液中miR-30a-5p 的表达水平差异有统计学意义（P ＜0.05），但由于miR-30a-5p在血清中的的差异更显著，故仅选取血清miR-30a-5p 的表达水平作为随访研究指标。见表1。

表1 两组基线资料比较

2.2 PNS 多因素回归分析 BMI、TC、LDL、-2MG、miR-30a-5p 是PNS 的独立危险因素（均P ＜0.05），见表2。

表2 PNS 的多因素Logistic 回归分析

2.3 miR-30a-5p 对PNS 的诊断价值ROC曲线下面积为0.822，诊断特异性和敏感性分别为84.7%和89.6%，见图1。

图1 miR-30a-5p PNS 的ROC 曲线分析

2.4 PNS 患者血清miR-30a-5p 表达与激素治疗效果的关系

2.4.1 激素治疗敏感性与血清miR-30a-5p 表达水平的关系 治疗前，激素耐药组血清 miR-30a-5p 表达水平（9.165±0.876，n=55）高于激素敏感组（7.864±0.699，n=105），差异有统计学意义（t=10.229，P ＜0.05）；治疗后，两组miR-30a-5p 表达水平均有不同程度的下调（t耐药组=21.298，t敏感组=14.250，均P ＜0.05），其中激素敏感组患者miR-30a-5p的表达水平（6.022±0.656）低于激素耐药组（7.745±0.711），差异有统计学意义（t=15.328，P ＜0.05）。

2.4.2 影响PNS 预后的多因素分析TC、LDL、-2MG 和miR-30a-5p 是影响激素治疗PNS 临床疗效的危险因素（均P ＜0.05），见表3。

表3 激素治疗PNS 预后影响因素的多因素Logistic 回归分析

3 讨论

PNS 的诊断与预后预测相关的生物标志物研究是今年的研究热点之一[5]。探寻可靠、稳定和准确的方法来早期诊断本疾病，以便尽早采取正确的治疗方法对疾病预后具有重要的临床意义。已有越来越多的学者关注miRNA在肾病综合征中的作用[6]。

miR-30a-5p是定位于人类6 号染色体的q13 位置，来源于部分内含子的转录单元，其在多种疾病中产生作用。miR-30a-5p 能够调节LIM-类同源盒因子Xlim1/Lhx1 并限制其活性，而Xlim1/Lhx1 是肾脏发育的一个重要转录调节者[7]。这提示miR-30a-5p 对足细胞乃至肾小球滤过功能至关重要。miR-30a-5p是小儿NS潜在的分子诊断指标，将血清或尿液miR-30a-5p与现有的生化指标联合检测，将有可能提高临床对NS的诊断效能。但miR-30a-5p 在PNS 中具体的临床价值未被阐明。

本研究显示，PNS 患者血清中miR-30a-5p 的表达水平上调，与肾功能损伤和血脂指标有关。ROC 曲线分析发现，miR-30a-5p对肾病综合征具有较强的诊断能力。笔者对患者进行为期1 年的跟踪随便和检测，发现miR-30a-5p与PNS的激素治疗预后密切相关，且其对PNS预后判定价值较高。这提示miR-30a-5p 为PNS 潜在的新分子标志物。

血清学标本易于收集且是生理状态的良好信息记录体。本研究发现血清中miR-30a-5p 的表达水平与PNS 的激素治疗预后密切相关，且对PNS 诊断价值和预后判定价值较高。这提示miR-30a-5p 可作为PNS 诊断与预后预测的新生物标志物[8]。

本研究纳入样本量有限，且随访时间为1 年，样本量及随访时间仍需增加。此外，本研究对激素治疗的效果进行了跟踪，没有研究其他治疗方法对PNS 的影响，也没有涉及miR-30a-5 在PNS 中的作用机制。因此，需要进一步研究证实。