邓璐 曾利伟 焦纪兰 江辉

口腔鳞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)是常见的头颈部恶性肿瘤之一，居全球恶性肿瘤的第八位，具有快速增长、侵袭性强和易转移等特性[1]；临床上，手术、放疗和化疗是口腔鳞癌的主要治疗手段，但患者5年生存率仅在65%左右[2]。因此，深入探讨口腔鳞癌的发病机制寻找新的治疗策略是有必要的。人Pin2结合蛋白X1(PIN2-interacting protein X1，PinX1)是一种端粒调控基因，定位于人8p23染色体上[3]。研究[4-6]显示，PinX1在非小细胞肺癌、肝癌和乳腺癌等多种肿瘤中常见低表达，与肿瘤临床病理特征和不良预后密切相关。且PinX1可影响细胞增殖、侵袭能力和凋亡水平发挥抑癌作用。口腔鳞癌组织PinX1表达降低与淋巴结转移密切相关[7]。然而，PinX1在口腔鳞癌中的调控作用未见报道。因此，本研究通过开展体外细胞实验，通过观察PinX1对口腔鳞癌HSC6细胞功能的影响及调控机制以揭示PinX1在口腔鳞癌发生发展中的作用。

1 材料与方法

1.1 主要试剂、材料和仪器

人正常口腔上皮细胞株HOEC(上海雅吉生物公司)；口腔鳞癌细胞株HSC6(上海通派生物公司)；胎牛血清、青链霉素混合液(大连宝生物公司)；低糖改良Eagle培养基(dulbecco's modified eagle medium，DMEM)、高糖培养基(roswell park memorial institute，RPMI)-1640培养基(Hyclone公司，美国)；PinX1、增殖核抗原Ki67、基质金属蛋白酶9(matrix metalloprotein 9，MMP-9)、B淋巴细胞瘤-2基因(B-cell lymphoma-2，Bcl-2)、磷酸化的磷脂酰肌醇-3-羟激酶(phosphorylation phosphatidylinositol-3-hydroxykinase,p-PI3K)、磷酸化的蛋白激酶B(protein kinase B,p-Akt)、PI3K、AKT和甘油醛-3-磷酸脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPDH)抗体(Santa Cruz公司，美国)；辣根过氧化物酶标记的二抗(北京中杉金桥公司)。脂质体2000(广州锐博生物公司)；BCA蛋白定量试剂盒(Pierce公司，美国)；胰蛋白酶、蛋白提取试剂盒、细胞计数(cell counting kit-8，CCK-8)试剂盒、膜联蛋白 V-FITC(Annexin V-FITC)/碘化丙啶(propidium iodide，PI)凋亡检测试剂盒(上海碧云天公司)；……