胡培丽，阮浩澜，贺抒，张杨，李波，邢书霞，孙磊，王钢力，

(1.中国食品药品检定研究院，北京100050；2.广东省药品检验所，广东广州510663；3.成都市食品药品检验研究院，四川成都610000)

小鼠局部淋巴结试验(local lymph node assay，LLNA)是皮肤致敏多种替代方法中应用最为广泛的方法之一，Takeyoshi等建立了基于掺入溴脱氧尿嘧啶核苷(5-bromo-2-deoxyuridine，BrdU)和酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)的LLNA改良方法(LLNA:BrdU-ELISA)，用示踪剂替代放射性标记物。LLNA和LLNA:BrdU-ELISA方法中均推荐使用CBA/JN小鼠，该品系小鼠在国内供应较少，价格昂贵；而BALB/c小鼠遗传稳定，在国内应用广泛，前期研究结果表明两品系小鼠只是反应程度有一定的差异，对化学物和化妆品致敏性判断及致敏强度分级并无显著影响。由于传统致敏性试验要避免受试物出现过度的皮肤刺激反应，因此本研究应用BALB/c小鼠LLNA:BrdU-ELISA方法对22种化学物和5种化妆品的皮肤刺激性和致敏性同时进行检测，并与相关传统试验数据进行比较，进一步对该方法进行评价。

1 材料与方法

1.1 受试物

溶剂为丙酮/橄榄油(acetone/olive oil，AOO)[按4∶1(V/V)配制而成]、丙酮(acetone，ACE)、二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide，DMSO)或蒸馏水。2,4-二硝基氯苯、间苯二甲酸二甲酯、丁子香酚、异丁子香酚、3-氨基苯酚、反式肉桂醛、己基肉桂醛、水杨酸甲酯、香叶醇、对苯二酚、水杨酸己酯、水杨酸、甲醛、戊二醛、六水硫酸镍、二氯化钴、重铬酸钾和乳酸均购自Sigma公司；异丙醇、丙二醇、正己烷和苯购自国药集团化学试剂有限公司。5种化妆品为超市随机采购，标识齐全，成分标识清晰，使用说明明确。

1.2 实验动物

SPF级BALB/c小鼠，雌性，8～10周龄，由中国食品药品检定研究院实验动物资源中心提供，合格证号为SCXK(京)2014-0013。……