李康，黄洋，石继春，王春娥，徐潇，陈琼，赵丹，叶强

(中国食品药品检定研究院生物制品检定所细菌多糖和结合疫苗室，中国医学细菌保藏管理中心，北京 102629)

肺炎链球菌是引起儿童肺炎球菌性疾病的主要病原菌，其感染可引起急性中耳炎、鼻窦炎、肺炎、脑膜炎、菌血症等[1]。根据荚膜多糖抗原的不同，肺炎链球菌可以分为90多个血清型[2]。肺炎链球菌标准菌株是研制肺炎链球菌疫苗及诊断试剂重要的原材料，因此肺炎链球菌的质量控制至关重要。传统的肺炎链球菌质量控制方法如培养特性、染色镜检、生化反应、胆汁溶菌试验、奥普托欣试验、荚膜肿胀试验等在肺炎链球菌的分离、鉴定和质量控制中发挥了重要的作用[3-4]，但部分菌株缺乏相关的分子生物学数据，无法准确分辨菌株之间的差异，质量标准有待进一步提升。因此，本研究主要针对中国医学细菌保藏管理中心(National Center for Medical Culture Collections, CMCC)保藏的13株肺炎链球菌标准菌株，在传统质量检定的基础上，进行16S rRNA基因分析和多位点序列分型(multilocus sequence type, MLST)，补充这些菌株分子生物学质控数据，为进一步完善肺炎链球菌的质量标准提供数据支撑。

1 材料和方法

1.1菌种 13株肺炎链球菌标准菌株CMCC(B)31001、31439、31447、31456、31477、31495、31510、31547、31310、31228、31687、31761和31267来源于CMCC。

1.2主要仪器与试剂 NU-5810E型CO2培养箱(NUAIRE公司)，BX-51型生物显微镜(OLYMPUS公司)，microTyper MS飞行时间质谱系统(江苏天瑞公司)，PTC-0200型基因扩增仪、powerpac型电泳仪电源、Gel Doc XR+型凝胶成像分析系统(Bio-Rad公司)。哥伦比亚血琼脂(BD公司)，肺炎链球菌分型血清或因子血清(丹麦血清学研究所)，细菌基因组DNA提取试剂盒(Tiangen公司)，Premix Taq和DL2000(TaKaRa公司)，PCR引物由上海英潍捷基公司合成。……