陈洪清，梁梅芳，梁丽霞，苏晓梅，伍肇欣

（肇庆市第一人民医院检验科，广东肇庆 526000）

梅毒是一种因感染梅毒螺旋体所引起的慢性、系统性疾病，其被列为乙类传染病。因其病程长，若不及时治疗不仅会对患者身体健康产生危害，也会对他人的生命安全产生威胁，故而加强对梅毒患者的早期诊治十分重要。实验室检查是诊断梅毒疾病的有效手段，特别是血清学检查方法，梅毒螺旋体颗粒凝集试验（TPPA）与酶联免疫吸附法（ELISA）是较为常见的血清学检查手段。ELISA具有操作方便、灵敏度高及价格低廉等优势，目前被广泛应用，但仍存在一定的假阴性和假阳性，可导致漏诊、误诊[1]。TPPA应用基因工程技术，能吸附已知抗体或抗原与其相应载体表面，后通过酶标记抗原抗体反应，利用洗涤法洗掉液相中游离成分，通过对底物进行观察并得出结果，诊断效能高，但两种诊断方法的灵敏度不同，可引起结果不一致，在低浓度样本中更为明显[2]。基于此，本研究对比了TPPA联合ELISA与单独检测梅毒的诊断效能和应用价值，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 回顾性分析2020年1月至12月于肇庆市第一人民医院进行血清学检测的800例疑似梅毒患者的临床资料，其中499例确诊为梅毒患者纳入梅毒组，梅毒组患者中男性317例，女性182例；年龄20～59 岁，平均（35.45±3.70）岁；病程 9 个月 ～ 2 年，平均（1.06±0.12）年。诊断标准：参照《2015年美国疾病控制中心性传播疾病诊断和治疗指南（续）：梅毒的诊断和治疗指南》[3]中的相关诊断标准。纳入标准：符合上述诊断标准，且经镀银染色检测呈阳性者；均接受TPPA、ELISA检测者；临床资料完整者等。排除标准：近期未接受过相关治疗者；心、肝、肾等器官严重受损者；合并严重精神障碍疾病者等。剩余301例非梅毒者为非梅毒组，非梅毒组中男性180例，女性121例；年龄23～62岁，平均（40.29±5.11）岁。研究在肇庆市第一人民医院医学伦理委员会审核批准下实施。

1.2 方法 所有受检者检测当天空腹、前1 d晚上10：00后禁食，于无菌条件下采集受检者外周静脉血5 mL，置于无抗凝剂采血管中，以4 500 r/min离心10 min处理，收集血清。ELISA检测：使用ELISA试剂盒，将待测样本对应微孔板按序编号，设阴性对照3孔、阳性对照2孔和标准空白对照1孔，37 ℃孵育1 h，洗板5次，之后于每孔加入酶标试剂100 μL，空白孔除外，继续孵育0.5 h，再次洗板5次后每孔加入显色剂A、B液各50 μL，震匀后，在37 ℃环境下显色30 min，每孔加终止液50 μL，通过酶标仪波长450 nm读取数值。TPPA检测：使用TPPA试剂盒，用微量滴管将血清稀释液滴入微量反应板第1孔中，共计4滴（100 μL），第一孔用微量移液管取2 μL样本加入，混匀一段时间后取出25 μL，后依次同上操作，从第1孔，稀释至第4孔，用试剂盒所提供的滴管于第3孔滴入1滴25 μL未致敏粒子，第4孔加入致敏粒子25 μL，用平板混合器以不会导致微量反应板内容物溅出的强度混合30 s，加盖后于室温（15～30 ℃）下水平静置，2 h后观察反应现象。

1.3 观察指标 ①分析ELISA检测梅毒的结果。②分析TPPA检测梅毒的结果。③分析ELISA联合TPPA检测梅毒的结果。④分析两种检测方法对梅毒的诊断效能，包括灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值。其中灵敏度=真阳性例数/（真阳性例数+假阴性例数）×100%，特异度=真阴性例数/（真阴性例数+假阳性例数）×100%，阳性预测值=真阳性例数/（真阳性例数+假阳性例数）×100%，阴性预测值=真阴性例数/（假阴性例数+真阴性例数）×100%。

1.4 统计学分析 文中数据应用SPSS 23.0统计软件进行分析处理，计数资料用[ 例(%)]表示，行χ2检验。以P＜0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 ELISA检测梅毒的结果 ELISA检测梅毒患者457例，非梅毒者343例，其中真阳性439例，真阴性283例，见表1。

2.2 TPPA检测梅毒的结果 TPPA检测梅毒患者492例，非梅毒者308例，其中真阳性452例，真阴性261例，见表2。

2.3 ELISA联合TPPA检测梅毒的结果 ELISA联合TPPA检测梅毒患者482例，非梅毒者318例，其中真阳性476例，真阴性295例，见表3。

表3 ELISA联合TPPA检测梅毒的结果(例)

2.4 两种检测方法单独与联合检测对梅毒的诊断效能 ELISA联合TPPA检测梅毒的灵敏度、特异度、阴性预测值均显著高于ELISA、TPPA单独检测，阳性预测值高于TPPA单独检测，差异均有统计学意义（均P＜0.05），见表 4。

表4 两种检测方法单独与联合检测对梅毒的诊断效能(%)

3 讨论

梅毒对人体产生的危害较大，若未能及时发现和诊治，在感染后1～2年内具有强烈的传染性，患者的精液、乳汁和唾液中均有梅毒螺旋体的存在，其会造成血管塌陷，引发一系列血管炎症、溃疡等病变，对人体系统器官造成严重损伤，且这种损伤是不可逆的。该疾病具有病程长、临床表现复杂、多样性等特点，诊断难度较大。血清学检查方法为其主要检测手段，有甲苯胺红不加热血清反应素试验、TPPA、ELISA、化学发光等，选择合适的检测方法能避免漏诊，有助于临床诊治[4]。

ELISA检测操作简单、成本低，结果清晰易判读，且资料易储存整理，其在大量疑似梅毒标本筛查中有显著优势。但值得注意的是，ELISA主要检测的是梅毒免疫球蛋白G（IgG）和免疫球蛋白M（IgM）混合抗体，而梅毒患者经有效治疗后，即便是患者治愈后，IgG抗体也会长期伴随甚至出现终身的阳性，无法得知梅毒是否处于活动状态；另外ELISA受所用的标记抗原、纯度和抗原种类、检测步骤等因素的影响，很有可能会出现一定的假阳性或假阴性[5]。可见，单一应用ELISA方法检测梅毒，很有可能会出现误诊或漏诊的情况，需结合其他检测方法来弥补不足[6]。TPPA通过将梅毒螺旋体毒株制备成抗原，能与致敏粒子进行有效结合，产生凝聚状颗粒，灵敏度高，且其不受生物因素的影响，但试剂较贵，步骤复杂，且只能通过肉眼观察评价结果，原始数据无法保存[7]。将两种检测方法进行有效结合，可提升检测灵敏度，可先以ELISA展开检测，若结果为阳性，进一步以TPPA展开检测，以提升诊断准确率[8]。本研究中，ELISA联合TPPA检测梅毒的灵敏度、特异度、阴性预测值均显著高于ELISA、TPPA单独检测，阳性预测值高于TPPA单独检测，表明两种方法联合检测可提高梅毒检测的诊断效能，在最大程度上减少误诊、漏诊。

综上，ELISA操作简单、快捷，适用于大量疑似梅毒筛查中，联合TPPA检测能提高诊断效能，更好地为患者后期治疗提供有利的诊断依据，推广应用价值较高。