李志慧 冯 龙 郑文锦 孙 颖 夏金婵 梅 雪 江 华 李晓娟

（河南中医药大学医学院，郑州450046）

获得性免疫缺陷综合征（AIDS）是由人类免疫缺陷病毒（HIV）引起的传染性疾病。HIV-1 进入靶细胞需要两种受体：主要受体CD4 和辅助受体CCR5（或CXCR4）[1］。辅助受体CCR5（或CXCR4）首先与CD4 分子结合，形成二聚复合体，然后HIV gp120 再与辅助受体结合，使其发生构象改变，暴露gp41 位点，从而引发HIV 病毒包膜与靶细胞膜的融合[2-4］。趋化性细胞因子受体CCR5（CC-chemokine receptor 5，CCR5）作为嗜巨噬细胞性HIV-1 病毒的辅助受体，近年来备受关注。因此，干预CCR5 的启动子，阻断HIV 早期感染，为防治艾滋病带来了新希望。

姜黄素是从传统中药姜黄根茎中提取的活性成分，具有强大的抗肿瘤、抗炎、抗氧化功能[5］。近年研究发现，姜黄素可以使慢性感染HIV-1和HSV-2的T细胞和原代人类生殖器上皮细胞的病毒复制显著降低[6］。同时，姜黄素也是HIV 整合酶和蛋白酶的抑制剂[7］。因此，姜黄素的分子结构可以作为抗HIV 新药设计的结构基础，具有开发潜力。但姜黄素抑制HIV 感染辅助受体CCR5 的确切机制仍然没有探明，欠缺明确的科学证据。因此，本研究采用双荧光素酶报告基因技术，以萤火虫荧光素酶作为报告基因，用于反映CCR5 启动子的活性。载体下游重组入海肾荧光素酶（hRluc）基因，作为本底对照报告基因。通过序列分析，发现由于hRluc 单元具有两个SV40 增强子，使hRluc 基因表达活性较强，削弱了上游萤火虫荧光素酶的表达，使得双荧光素酶报告基因表达载体不能真实反映出上游CCR5 启动子的活性[8］。因此，本实验对双报告系统进行优化，通过PCR 技术，扩增出了保留hRluc 单元中SV40 部分片段的基因片段（命名该基因片段为Rluc）。……