艾孜子·阿不来提 艾力江·多力坤 陈康

非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC)是肺癌的常见病理类型，多数患者发现时已经达晚期[1]。肿瘤细胞的迁移、侵袭在肿瘤的复发转移过程中发挥重要的作用。因此，寻找到抑制NSCLC迁移、侵袭的靶点对于提高患者的预后尤为重要。microRNAs(miRs)是长度22nt 的内源性非编码RNA，与靶基因相互作用后调控转录及转录后基因表达。有报道称，miR-200作为抑癌基因，可抑制多种恶性肿瘤细胞的增殖、侵袭，促进凋亡[2-4]。戚永超等研究发现[5]，肺癌患者血清中miR-200水平低表达，与淋巴结转移有关。但miR-200与NSCLC细胞的恶性生物学行为的关系尚不清楚。程序性死亡受体配体-1(Programmed death-ligand 1，PD-L1)属于负性协同刺激分子，在免疫应答中起到负性调控作用[6]。研究发现，乳腺癌组织中肿瘤浸润淋巴细胞PD-L1高表达患者预后良好，复发率低[7]。PD-L1还可以协助肿瘤逃避监视，促进肿瘤细胞的增殖、侵袭、转移等[8]。张宇轩等研究发现，PD-L1下调后可促进非小细胞肺癌细胞的恶性生物学行为[9]。团队前期通过在线网站分析发现，miR-200与PD-L1存在一定的互补碱基对，但两者是否存在靶向关系尚不清楚。基于上述研究，本研究将miR-200 转染到NSCLC细胞A549，探讨miR-200对肿瘤细胞增殖、侵袭及迁移的影响及机制，以期为NSCLC的治疗提供靶点。

资料与方法

一、实验材料

肺癌细胞株A549，正常肺成纤维细胞HLF-1(上海生命科学研究所)；杜氏改良伊格尔培养基( Dulbecco′smodified Eagle medium,DMEM)培养液、双抗、胰蛋白酶(Biosciences，美国)；miR-NC、miR-200-mimic、si-NC、si-PD-L1、pEGFP、pEGFP-PD-L1、anti-miR-200、anti-miR-NC、MUT-PD-L1和 WT- PD-L1(上海生工生物有限公司)；LipofectAMINE 2000脂质体转染试剂盒(BioVision公司，美国)；兔抗人PD-L1、β-actin多克隆一抗、鼠抗兔单克隆二抗(Sigma公司，美国)；……