孙万里 郭玉琪 王月 李养军 杨振华 张卫东 曹杨 任云霞

结核病(Tuberculosis，TB)是由致病菌结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis，MTB)感染所引起的呼吸道系统慢性传染疾病，MTB是一种兼性细胞内寄生菌，机体感染MTB时，诱导巨噬细胞自噬与凋亡，自噬是巨噬细胞清除病原体的一种防御机制[1-3]。因此，深入研究BCG感染引起巨噬细胞凋亡、自噬的作用机制，有助于提高巨噬细胞对药物的敏感性，为结核病治疗靶标的研究提供依据。丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase，MAPK)是一类由脯氨酸介导的丝氨酸/苏氨酸活性的蛋白激酶，是介导信号从细胞表面传递到细胞内的重要转导通路之一，在细胞增殖、分化、迁移、凋亡等生理过程中发挥作用，c-JunN 末端激酶(c-Jun N-terminal kinase，JNK)为MAPK通路蛋白之一，目前有多项研究表明 MAPK 信号家族在细胞或动物试验的自噬各阶段发挥重要作用[4-5]。郭伟伟等[6]构建新生大鼠缺血再灌注(I/R)模型，过表达miRNA-138后发现，p-p38/p38、p-c-jun/c-jun 及 p-JNK1/2/JNK1/2显著下调，表明miRNA-138可通过抑制JNK/p38 MAPK通路，抑制大鼠心肌细胞的凋亡，并减轻活性氧损伤，从而保护新生大鼠心肌细胞。赖华毅等[7]研究表明， 鼠伤寒沙门氏菌spvB基因对肠上皮细胞自噬的抑制作用，可能与其对细胞p38MAPK通路的负调控相关。但JNK/MAPK通路对结核杆菌感染的巨噬细胞凋亡、自噬的作用报道较少，因此，本研究通过构建卡介苗菌株(Bacillus calmette guerin,BCG) 感染的巨噬细胞模型，探索JNK/MAPK通路在BCG 感染的巨噬细胞中的作用机制，以期为临床结核病的防治提供理论依据。

资料与方法

一、实验材料

小鼠巨噬细胞 RAW264.7由中科院上海细胞库提供；BCG菌株由上海生物制品研究所提供；……