杨 颖,胡 家,张 悦

(1首都医科大学中心实验室,北京 100069;2首都医科大学基础医学院生物化学与分子生物学系;*通讯作者,E-mail:yy9358@qq.com)

肾癌(RCC)是最常见的肾脏恶性肿瘤,约占成人恶性肿瘤的2%。其中,肾透明细胞癌(ccRCC)是最常见的亚型,占所有肾癌病例的75%[1]。20%-30%的患者在初诊时就被诊断为局部进展性或转移性ccRCC。虽然外科切除术是局限性ccRCC患者的有效治疗手段,约30%的患者仍然会在术后15-18个月出现远处转移,进展性ccRCC患者的5年生存率低于10%[2,3]。近年多项研究表明ccRCC的发生与酪氨酸激酶受体和mTOR信号通路的过度激活相关联,相应的靶向治疗虽然提高了晚期患者的生存率,但是疗效有限,仅有10%-30%的患者达到完全或部分缓解[4]。因此,寻找和发现有预测价值的生物标记物对于指导ccRCC的精准治疗具有重要的意义。

我们前期研究发现PDZ蛋白NHERF3在ccRCC组织中表达水平明显下调,并且多因素分析结果提示NHERF3可以作为ccRCC患者生存的独立预后因子[5]。在研究过程中,我们采用了iTRAQ定量蛋白质组学、免疫组化和Western blot等技术对ccRCC组织中的NHERF3蛋白进行定量分析,这些方法均需要对样品进行直接或间接标记,操作步骤繁琐,实验周期长,并且无法实现对肿瘤组织样品中NHERF3浓度的定量分析。表面等离子共振(SPR)是无标记定量分析生物分子间相互作用的技术,近年来,SPR技术也应用于复杂样品成分的定量研究[6-8],为此,本次实验拟采用SPR技术建立无标记定量检测ccRCC组织中NHERF3蛋白浓度的方法。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 试剂 CM5传感芯片、HBS-EP+、氨基偶联试……