张祎明,宋 阳,高 扬,张 静,韩玉琴

(承德市儿童医院麻醉科,承德 067000;*通讯作者,E-mail:zhangyimingcd@yeah.net)

七氟醚是外科手术中常用的吸入麻醉剂,因其气道刺激性小、麻醉过程平稳、苏醒迅速等特点,广泛应用于新生儿、婴幼儿的手术麻醉[1]。妊娠后期至出生后6个月是人类大脑发育的高峰期[2]。既往研究表明,新生儿早期多次暴露于七氟醚与其学习认知功能障碍有关[3-5]。目前研究发现,七氟醚对学习认知功能障碍的影响可能与其诱导海马区一些基因的改变从而降低海马神经元的再生和存活有关,但具体机制尚不清楚[6,7]。

微小RNA(miRNAs)是一类小的非编码RNA,由22-25个核苷酸组成,存在于所有真核生物中,参与细胞生命活动的调控[8]。研究显示miRNA介导的基因调控与神经精神功能障碍有关[9,10]。近期叶济世等[11]通过miRNA微流体芯片分析显示,miR-214在七氟醚吸入麻醉的新生大鼠海马组织中表达明显上调,可能与七氟醚吸入麻醉诱发的新生大鼠的发育期神经毒性有关。至今,miR-214对七氟醚吸入麻醉诱发的新生儿学习认知能力的影响及作用机制尚不明确。因此,本研究旨在探讨miR-214在七氟醚麻醉后新生小鼠海马区的表达变化,并进一步观察抑制miR-214对七氟醚麻醉后新生小鼠学习认知能力的影响和可能的机制。

1 材料与方法

1.1 实验试剂

七氟醚购自日本Maruishi公司;antagomiR-NC、antagomiR-214及PCR引物购自上海吉玛制药公司;TUNEL(绿色荧光)细胞凋亡检测试剂盒购自江苏碧云天公司;IL-1β、TNF-α和IL-6 ELISA检测试剂盒购自上海酶联生物公司;Trizol购自美国Invitrogen公司;逆转录cDNA试剂盒、qRT-PCR试剂盒购自日本TAKARA公司;一抗p-PI3K、GAPDH抗体购自美国Santa Cruz公司;HPR偶联的二抗购自英国Abcam公司。……