闫婧，石晓丽，唐波，宝山，巴乙拉，张冬梅，杨桂娥

（1 包头市食品药品检验检测中心，内蒙古 包头；2 内蒙古自治区国际蒙医医院，内蒙古 呼和浩特）

0 引言

萨布如木病洗剂为蒙古族验方，由内蒙古国际蒙医医院整理并提供。洗剂以苦参、毛冬青、黄柏等9 味药材，经粉碎、水煎、加入芒硝等溶解、混匀制成，为外用的棕色液体。清热燥湿，杀虫止痒，养血祛风，活血解毒。用于肛门瘙痒、湿疹、湿疣及其他肛门皮肤疾患，以及痔疮手术后，肛门创面恢复期，创伤而局部的水肿疼痛，创伤面愈合。苦参为方中主药，性苦、寒，味极苦，归心、肝、胃、大肠、膀胱经。具有清热燥湿，杀虫，利尿的作用[1]。苦参碱为苦参的有效成分之一，可在机体中发挥抗氧化、抗过敏、抗炎、镇痛等作用[2-4]，故建立合理、有效的测定方法对其质量进行控制，对提高该制剂的用药安全具有一定的现实意义。本研究中采用高效液相色谱（high performance liquid chromatography,HPLC）法测定萨布如木病洗剂苦参中苦参碱的含量。

1 仪器与试药

1.1 主要仪器

1260 Ⅱ高效液相色谱仪（安捷伦公司）；色谱柱:Venusil MP C18：4.6mm×250mm，5μm（博纳艾 杰尔）；Ultimate AQ-C18：4.6mm×250mm，5μm（月 旭）；MS205DU 十万分之一电子分析天平（梅特勒-托利多仪器有限公司）；ME204E 万分之一电子分析天平（梅特勒-托利多仪器有限公司）；KQ-500DE 数控超声清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。

1.2 试剂与试药

苦参碱（110805-201709），纯度：98.7%，购自中国食品药品检定研究院。三乙胺、磷酸购自天津市东丽区天大化学试剂厂；乙腈、甲醇为色谱纯（Fisher Scientific），水为超纯水；萨布如木病洗剂（内蒙古国际蒙医医院），批号分别为20180711，20180938，20180822 规格：500ml/瓶。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性实验

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-乙腈-三乙胺-磷酸盐缓冲液（pH=6.8）(10 ∶17 ∶0.1 ∶73)为流动相，流速1ml/min，检测波长220nm，柱温30℃，进样体积20μl。理论板数按苦参碱峰计算应不低于5000。

2.2 溶液制备

2.2.1 对照品溶液

取苦参碱对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含60μg 的溶液，作为对照品溶液。

2.2.2 供试品溶液

取本品混匀，精密量取10ml，置分液漏斗中，用三氯甲烷提取3 次，每次15ml 合并提取液，水浴蒸干，残渣用适量甲醇溶解，并转移至10ml 量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀用0.45μm 滤膜过滤，作供试品溶液。

2.2.3 阴性对照溶液

按处方比例，制备不含苦参的阴性样品，再照“2.2.2”项下方法制备成阴性对照溶液，即得。

2.3 专属性试验

精密吸取对照品溶液、供试品溶液及阴性对照溶液各20μl，按“2.1”色谱条件进行实验并记录色谱图。供试品呈现与对照品保留时间相同的色谱峰，阴性对照在相应位置无色谱峰。

2.4 线性范围

取苦参碱对照品适量，精密称定，加甲醇制成对照品溶液（64.26μg/ml）；精密量取上述标准对照品溶液配制成浓度为321.3ng/ml、642.6ng/ml、1285.2ng/ml、1927.8ng/ml、2570.4ng/ml、3213.0ng/ml 的标准系列，按上述色谱条件测定，以峰面积对含量进行线性回归分析，结果苦参碱在0.3213μg/ml-3.2130μg/ml 范围内呈良好的线性关系。回归方程为Y=628.51X-32677，R2=0.9999 结果表明，苦参碱在浓度为0.3213μg/ml-3.2130μg/ml 范围内呈良好线性关系。

2.5 精密度

取苦参碱对照品（浓度64.26μg/ml），连续进样6 次。其RSD 为0.42% (n=6)，表明仪器的精密度良好。

2.6 重复性

取同一供试品（20141010）6 份，按供试品制备方法制备样品，高效液相色谱在220nm 波长处测定峰面积，按外标峰面积计算测定每份样品的含量，RSD 为0.60%，表明该方法重复性良好。

2.7 稳定性

取同一供试品（批号20190913）并制备成供试品溶液后分别于制备 0h、4h、10h、12h、15h、17h、24h 时测定峰面积，结果见表1。结果RSD 为1.6% 。表明供试品溶液在24h 内稳定。

表1 供试品中苦参碱的峰面积积分值

2.8 样品回收率

取已知含量的供试品6 份（批号20141010，含量55.62μg/ml），每份分别精密量取5ml 置于分液漏斗中，精密加入苦参碱对照品溶液（0.2142mg/ml）1ml，按照供试品溶液方法制备并测定，记录色谱图，计算回收率，平均回收率为100.15%，其RSD 为1.96%，表明该方法准确可靠。

2.9 供试品测定

依据建立的苦参碱含量测定方法，对3 批萨布如木病洗剂中的苦参碱含量进行考察，其苦参碱含量分别为54.65μg/ml、55.62μg/ml、52.55 μg/ml。

2.10 耐用性试验

分别用不同厂家型号色谱柱Agela Venusil MP C18、ZORBAXSB-C18、CAPCELL PAK C18，取样品（批 号20140702）按供试品制备方法制备样品，测定含量，相对偏差0.1%，表明该方法耐用性较好，方法可行有效。

3 讨论

3.1 提取方法

由于苦参碱溶于水，苯，三氯甲烷，乙醚，难溶于石油醚中，本研究考察了三氯甲烷、三氯甲烷-甲醇（1 ∶1）、三氯甲烷-冰乙酸（4 ∶1）3 种提取溶剂，三氯甲烷提取的苦参碱含量高于三氯甲烷-甲醇（1 ∶1）、三氯甲烷-冰乙酸（4 ∶1），原因可能是三氯甲烷溶剂对样品的渗透性较好，因而提取率更高。此外还考察了提取次数的影响，采用三氯甲烷依次为15ml、15ml、15ml 3 次提取后，对样品第4 次提取的苦参碱进行了考擦，剩余提取液在图谱相应位置无苦参碱峰，结果表明，在提取次数为3 次时达到最大提取效率，增加提取次数苦参碱含量没有增加。因此选择提取3 次，每次15ml 三氯甲烷为最优提取条件。

3.2 检测波长的选择

取苦参碱对照品溶液和样品提取液在高效液相色谱仪上，用二极管阵列检测器在190-400nm 全波长扫描，苦参碱在201nm 处有最大吸收，考虑到甲醇和乙腈在200nm处都有干扰，参照《中国药典》2015 年版一部“苦参”项下含量测定方法，最后确定220nm 为最佳检测波长。

3.3 转移率及含量范围

按三批样品测定苦参碱的平均含量为54.27μg/ml，苦参碱的平均转移率大约在81.34%。考虑生产工艺问题，平均含量乘以平均转移率，结果再下调10%计算，暂定为本品含苦参以苦参碱（C15H24N2O）计，不得少于39.0μg/ml。

综上所述，药品标准在药品质量监管和质量控制中均起到十分关键的作用。医院制剂品种质量标准是制剂配制、质量控制的依据之一[5]。本文建立了蒙药萨布如木病洗剂中苦参碱的含量测定方法，该方法科学、简便、专属性较强，为促进蒙药标准化，提高蒙药发展水平具有一定的积极意义[6-8]。