胡佳辰 金岩 刘文佳

肝脏组织工程研究是肝脏再生医学中的重要分支，旨在构建出肝功能替代治疗中的生物人工肝支持系统（Bioartificial liver support system，BALSS），或用于药物肝毒性筛查的生物肝组织［1］。然而，足量、易于获取的肝功能性细胞的来源问题仍未得到有效解决。HepG2 等永生化肝细胞系具有一定的肝细胞功能，具有较好的应用潜力，但肝细胞功能水平较差，是限制其在BALSS 和毒性筛查应用中的主要障碍［2－3］。

细胞的培养方式是影响细胞功能状态的关键［4－5］，通过改变HepG2 细胞的普通2D 培养方式，其肝相关功能也可得到提升。由于细胞的3D 培养形式使细胞更接近于体内的3D 生存模式，因而能提高体外培养细胞的功能基因表达，更有利于细胞的功能分化［6］。研究表明，3D 球状体的培养形式相比于普通的2D 培养，能更好地促进永生化肝细胞系和人原代肝细胞（Primary human hepatocytes，PHH）的肝功能表达［6－7］。另外，细胞外的基质微环境也是影响细胞功能状态的重要因素［8－9］。细胞外基质（Extracellular matrix，ECM）是体内细胞外基质微环境的重要载体。ECM 中包含了胶原蛋白、弹性蛋白、纤维连接蛋白、层粘连蛋白以及蛋白多糖等纤维骨架成分，这些成分为多种细胞生长因子的贮存和细胞的黏附提供了条件，从而促进细胞的存活和分化［10］。因此可以推测，以3D 形式构建球状体的同时加入ECM，能够更好地促进HepG2 细胞球状体的形成和肝相关功能的分化。

肝脏脱细胞细胞外基质（Decellularized extracellular matrix，dECM）是通过脱细胞的方法获取的组织特异性ECM［11］。通过对肝脏组织进行洗脱剂和酶等的灌流和洗脱，肝脏组织中的细胞成分被去掉，留下了组织特异性的ECM 成分和部分生长因子［10－11］。……