杜林 陆雯丽 刘庆芬 顾芬

如何修复皮肤缺损、减少瘢痕形成是临床亟待解决的问题。生物材料的进步与发展有望为解决该问题提供新思路及新策略。其中，明胶已被广泛地应用于多个领域［1－3］。明胶基凝胶允许水溶性添加剂，具有生物可降解性。但是，明胶基凝胶在空气中因快速干燥而导致硬化，影响其作为创面修复材料的稳定性和耐久性。研究证明，在明胶中加入食品级添加剂，如糖、甘油、柠檬酸等，不会损害材料的生物相容性和安全性，可产生具有弹性和韧性的凝胶组合物［4－5］。

我们以明胶为基底，加入可食用甘油，用以增强明胶的热稳定性及保水性，并利用柠檬酸使其交联，制备了新型甘油／明胶基水凝胶（GG 水凝胶），研究其生物相容性和修复皮肤缺损的效果，为进一步临床应用提供基础。

1 材料与方法

1.1 试验材料及仪器

高糖DMEM（Hyclone，美国）；胎牛血清（FBS）、1%的青链霉素和胰蛋白酶－EDTA（Thermo Fisher Scientific，美国）；明胶、柠檬酸和甘油（Merck，德国）；CCK－8 试剂（Dojindo，日本）；活死细胞染色试剂盒（上海翊圣生物科技有限公司）。

多功能酶标仪（Tecan Spark，瑞士），共聚焦显微镜（Leica，德国）。

1.2 方法

1.2.1 制备GG 水凝胶

将甘油（8 g）溶解在去离子水中（8 g）并加热至60 ℃。冷却至室温后，加入明胶粉末（4 g），浸泡1 h。混合物在70 ℃的烘箱中真空下搅拌1 h（2 350 r／min，45 kPa），并加入1%柠檬酸以获得均匀的成胶前液体。浇筑模具中，冷却即可得到凝胶。

1.2.2 细胞培养

人皮肤成纤维细胞（HSFs）来源于中国科学院生物化学与细胞生物学研究所。标准细胞培养环境下（37 ℃、5%CO2以及饱和湿度），使用含10% FBS和1%青链霉素的DMEM 培养，细胞达到80%融合后传代。……