牛华星，章安源，赵 见, 郭 腾，李有志，尹伶灵，刘少宁，陈 玲，魏秀丽，张志民，张传津*

(1.山东省兽药质量检验所，济南 250022；2.日照市东港区涛雒计生委,日照 276800)

芪蓝囊病饮是收载于《兽药质量标准》2017卷的纯中药制剂[1]，主要成分为黄芪、板蓝根、大青叶、地黄、赤芍，具有提高疫苗免疫应答效果(参考说明书的功能主治)。目前本制剂标准只是对黄芪、板蓝根、大青叶进行定性薄层鉴别，缺少对有效成份定量控制。有文献表明[2-3]，靛玉红(indirubin)是大青叶、板蓝根的主要指标成分，因此本文主要开展了反相高效液相色谱法测定靛玉红方法学研究，为完善芪蓝囊病饮的质量标准提供依据。

1 实验部分

1.1 仪器与试药 Waters e-2695(配二极管阵列检测器2998)；靛玉红对照品(批号：110717-200204)(中国药品生物检定所)；乙腈(色谱纯)；磷酸(分析纯，国药集团化学试剂有限公司)；水为超纯水；供试品：芪蓝囊病饮口服液(某公司提供，批号：202006271，202006281，202006291，202007271，202007281，202007291)，阴性空白制剂自制；其他试剂均为分析纯。

1.2 方法与结果

1.2.1 色谱条件 色谱柱为Waters Symmetry C18柱(250 mm×4.6 mm×5 μm)；流动相A：乙腈；流动相B：0.2%磷酸水溶液；流速：1.0 mL/min；进样量：10 μL；柱温：35 ℃。检测波长为289 nm，梯度洗脱条件见表1；

表1 梯度洗脱条件

1.2.2 溶液的制备 取13.58 mg靛玉红对照品，精密称定，加三氯甲烷配制成1358 μg/mL的对照品储备液。取1 mL储备液用甲醇制成67.9 μg/mL标准工作液，依次倍比稀释成系列浓度：2.0、1.5、1.0、0.8、0.6、0.5 μg/mL标准工作液。

取1 mL供试品溶液于50 mL，离心管中，加入9 ml三氯甲烷，振摇1 min，静置分层弃去上清液，0.22 μm微孔滤膜滤过，即得。另取不含大青叶的阴性空白制剂，同法制成阴性空白对照溶液。

1.2.3 专属性试验 分别吸取10 μL“1.2.2”项下阴性空白对照溶液、供试品溶液、对照品溶液，按“1.2.1”项下色谱条件，注入液相色谱仪，记录色谱图。……