魏欣宇，高 鹏，刘佳欣，王文锐，杨清玲，陈昌杰

据CA最新统计[1]，全球乳腺癌新发病例高达226万，成为世界第一大癌症，严重威胁了女性健康。乳腺癌的诊断和治疗正在向个性化、精准化发展，如化疗、内分泌治疗和靶向药物[2]。但目前面临的重要问题是，乳腺癌耐药性的产生和转移常导致治疗失败和肿瘤复发[3]。因此，阐明乳腺癌细胞产生耐药性的详细机制对于寻找潜在治疗靶点和乳腺癌早期诊断的生物标志物至关重要。外泌体作为一种运输载体，大小在40～160 nm，在基质和癌细胞之间传递核酸和蛋白质，介导细胞间的通讯，从而影响癌细胞的生物活性。由于富含各种生物分子，外泌体为生物液体检测提供了一种多组分诊断指标[4-6]。其中，microRNAs是内源性的小非编码RNA，具有调节转录后基因表达的功能。生理过程和病理，包括癌症、心血管和代谢性疾病都高度依赖miRNA。癌细胞释放的外泌体miRNA可以介导肿瘤微环境中细胞的表型改变，促进肿瘤生长和耐药。本研究主要探讨外泌体源性miR-5585-5p的表达情况和其介导的耐药机制。

1 材料与方法

1.1 细胞和试剂 人乳腺癌细胞株SKBR-3购自中国科学院上海细胞研究所得，课题组前期成功构建紫杉醇耐药细胞株SKBR-3/PR;胎牛血清、DMEM高糖培养基购自Hyclone公司;β-actin、P-GP、MRP 抗体购自Affnity;细胞凋亡试剂盒、BCA试剂盒购自碧云天公司；外泌体提取试剂盒购自贝贝生物科技有限公司；外泌体染料PKH26、PKH67购自上海宇玫博公司。

1.2 方法

1.2.1 细胞培养 细胞培养在含有10%胎牛血清的DMEM培养基中进行，置于5%CO2、37 ℃细胞培养箱中。……