杨秀玲

（河南省延津县人民医院病理科，河南 新乡 453200）

尖锐湿疣（Condyloma acuminatum,CA）作为常见性传播疾病，多发于青年群体，其患病率约为0.5%～1%，具有复发率高等特点[1]。相关研究表明，β连环素（β-catenin）作为环连蛋白家族成员，亦为Wnt信号转导核心蛋白，参与病理进展及分化，改变细胞周期变化[2]。核因子κB（NF-κB）作为基因多向性核转录因子，通过参与多种基因转录调控，诱导其在恶性肿瘤中呈异常表达，进而参与CA病理进展。近年相关研究证实β-catenin、NF-κB在多种肿瘤中均存在表达异常现象，但其表达水平与CA关联性研究较少[3-4]。基于此，本研究探讨β-catenin、NF-κB在CA患者角质形成细胞增殖能力中的关联性，现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取本院收治的CA患者92例（2019年1月至2021年1月）作为研究对象。纳入标准：符合《尖锐湿疣治疗专家共识（2017）》[5]诊断标准；肉眼可见菜花样、鸡冠样赘生物；疣状增生物多出现于肛门、肛周、会阴、生殖器等部位；无局部皮肤病；醋酸白试验阳性。排除标准：合并其他带状疱疹感染类疾病；代谢性疾病；其他类型性病；精神疾病。

按照感染类型分为高危组（n=41）与低危组（n=51）。高危组男26例，女15例；年龄（25～62）岁，平均年龄（43.68±9.11）岁；病程（2～12）年，平均病程（7.06±2.43）年。低危组男31例，女20例；年龄（24～64）岁，平均年龄（44.10±9.92）岁；病程（1～10）个月，平均病程（5.54±2.20）个月。同时选取同期于我院检查的112例健康体检者作为健康体检组，其中男65例，女47例，年龄（23～63）岁，平均年龄（43.24±9.88）岁，三组基线资料均衡可比（P＞0.05）。

1.2 方法 ① 检测方法：取CA患者皮损组织、健康体检组正常包皮、宫颈组织，使用石蜡包埋，制备切片，经脱蜡、水化处理后使用pH值7.4磷酸盐缓冲液冲洗，修复抗原，使用过氧化物酶阻断溶液，将标本方式于室温下孵育，10min后加入第一抗体，室温孵育过夜，后加之第二抗体，放置于室温下孵育，10min后加入50g链霉菌抗生物素-过氧化物酶溶液，继续放置于室温下孵育，10min后加入DAB显色、复染、脱水、透明、封片，使用400倍显微镜，观察标本染色情况，选取5个视野，计算100个细胞。② 角质形成细胞分离与培养：取CA患者皮损组织、健康体检组正常包皮、宫颈组织，使用PBS溶液浸泡10min，后使用PBS溶液洗涤3次，后将上述组织剪为小块，再次使用PBS溶液洗涤2次，加入Dispase酶，于4℃冰箱中放置8h，吸出酶液使用PBS溶液洗涤2次，加入混合消化液，37℃环境中放置5min，使用胰酶抑制剂终止反应，吹打为单细胞悬液，离心5min，弃上清液，重悬细胞，接种至培养板中，细胞长至70%～80%传代，细胞放置于-196℃液氮中保存，经免疫组化染色，倒置于显微镜下，溶细胞呈现为铺路石状，则鉴定为角质形成细胞。③ 标本阳性判定标准：染色强度评分：0分（无染色）、1分（淡黄色）、2分（黄色）、3分（棕褐色）。阳性细胞百分比评分：0分（阳性细胞百分比＜5%）、1分（阳性细胞百分比为5%～25%）、2分（阳性细胞百分比为26%～50%）、3分（阳性细胞百分比为51%～75%）、4分（阳性细胞百分比＞75%）。根据上述两项评分，将得分相加，≤2分为阴性，＞2分为阳性。④ 角质形成细胞增殖能力：使用四唑盐（MTT）比色法，将原代角质形成细胞制为悬液，接种至96孔板中，200μg/孔，3孔/组，孵育48h，后于孔内加入MTT溶液，继续放置于培养箱中培养4h，最后放入二甲基亚砜终止反应，摇晃均匀后，检测波长570mm处吸光度值。

1.3 观察指标 ① 三组β-catenin、NF-κB表达情况。② 角质形成细胞增殖能力。③ β-catenin、NF-κB与角质形成细胞增殖能力的关联性。

1.4 统计学分析 采用SPSS 22.0对数据进行分析，计量资料以（±s）表示，t检验，多重比较采用LSD-t检验，采用Spearman进行相关性分析，计数资料以（n，%）表示，X2检验，P＜0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 β-catenin、NF-κB表达情况 高危组、低危组β-catenin、NF-κB阳性率均高于健康体检组（P＜0.05），见表1。

表1 β-catenin、NF-κB表达情况（n，%）

2.2 角质形成细胞增殖能力 伴随时间延长，高危组、低危组角质形成细胞增殖能力呈升高趋势（P＜0.05），见表2。

表2 角质形成细胞增殖能力（±s）

表2 角质形成细胞增殖能力（±s）

组别 例数 光密度值24h 48 h 72h 96h高危组 41 0.40±0.03 0.42±0.05 0.43±0.03 0.48±0.10低危组 51 0.40±0.05 0.41±0.04 0.42±0.04 0.44±0.06健康体检组 112 0.38±0.04 0.38±0.03 0.41±0.03 0.42±0.05 F 5.997 22.348 5.972 12.732 P 0.003 ＜0.001 0.003 ＜0.001

2.3 β-catenin、NF-κB与角质形成细胞增殖能力的关联性 经Spearman相关性分析，β-catenin、NF-κB与角质形成细胞增殖能力呈正相关（r1=0.472，P＜0.001；r2=0.627，P＜0.001）。

3 讨论

CA多因HPV感染，诱发肛周及生殖器部分出现增生性病变，其发病率高居我国性传播疾病第3位，仅次于非淋菌性尿道炎、淋病。目前临床治疗CA方法较多，但因复发率高居不下，严重影响患者生活及心理健康。鉴于目前临床对β连环素、核因子κB表达水平与尖锐湿疣患者角质形成细胞增殖能力的关联性分析研究较少，本研究通过研究β-catenin、NF-κB表达水平及CA患者角质形成细胞增殖能力，观察其表达情况、增殖趋势变化，以期为CA临床诊治及预防提供科学参考依据。

HPV最初感染时为角质形成细胞，伴随机体内病毒DNA呈低水平时，逐步建立，形成稳定病毒基因组织，而后即可进入病毒周期生产阶段，进而影响其他免疫细胞、炎症反应、网络通路等[6]。临床认为，表皮细胞过度增殖，可促使真皮毛细血管增多，扩张管腔，诱发癌变。其中β-catenin作为新原癌基因产物，可通过结合多种蛋白质，促进肿瘤细胞增殖与分化，在不同类型细胞复合体内发挥不同生物学功能，并可通过平衡酪氨酸激酶与磷酸酯酶活性，达到抑制肿瘤细胞迁移及黏附[7-8]。另外，β-catenin作为Wnt信号通路中关键组成部分，可通过影响细胞迁移与黏附，调整靶基因转录，王云帆学者[9]认为，β-catenin蛋白表达水平与癌症患者病理分级存在直接关联。相关研究表明，CA患者于发病时，β-catenin水平mRNA表达水平呈异常状态，其细胞周期亦会发生变化[10]。NF-κB作为多功能转录因子，可调节多种基因表达，抑制细胞凋亡，提高细胞周期蛋白D1表达水平，促进细胞增殖及进展。除此之外，NF-κB可通过参与细胞增殖、促进血管生成、抑制细胞凋亡等方式参与CA病情进展[11]。本研究结果显示，高危组、低危组β-catenin、NF-κB阳性率高于健康体检组，且伴随时间延长，高危组、低危组角质形成细胞增殖能力呈升高趋势，β-catenin、NF-κB与角质形成细胞增殖能力呈正相关（P＜0.05）。可见，β-catenin、NF-κB可作为临床评估CA疾病感染类型的参考依据。

综上，β-catenin、NF-κB表达水平与CA患者角质形成细胞增殖能力呈正相关，时间越长，光密度值越高，细胞繁殖能力越强，因此，其表达水平可作为临床评估患者疾病感染类型的有效指标。