宫树一 王景续 穆胜凯

强直性脊柱炎(AS)是一种病程长和致残率高的自身免疫炎症性疾病，其中骶髂关节和中轴关节病变是其典型的病理特征，过度的骨形成可引起关节强直和脊椎畸形，影响患者的生活质量[1-3]。成纤维细胞是脊柱韧带和关节滑膜的主要成分，具有分化为成骨细胞的巨大潜能，是AS脊柱关节发生骨化的主要细胞[4]。目前，关于AS发生与发展的机制尚不清楚。因此，深入探讨AS成纤维细胞成骨分化的分子机制，寻找抑制成纤维细胞成骨分化的有效分子靶点对治疗AS具有重要意义。随着研究的不断深入，许多微小RNAs(miRNAs)在成骨分化和骨形成中的作用已被发现[5]。有报道[6]证实，miRNA-34a在炎症条件下可抑制成骨样细胞成骨分化，但其具体作用机制尚未阐明。因此，本研究通过观察miRNA-34a在AS滑膜成纤维细胞中的表达情况，并探讨miRNA-34a对细胞成骨分化的影响及其可能作用机制。

1 材料与方法

1.1 标本来源

收集2017年10月至2019年5月于本院行髋关节置换手术的5名AS患者的滑膜组织标本，年龄26～48岁，男4例，女1例；患者均符合纽约诊断标准(1984年修订)。另收集5例创伤性骨折患者的滑膜组织作为对照，其中年龄介于46～55岁，男3例，女2例。所有受试者均排除髋关节滑膜炎和风湿病等，组织标本的收集均获得患者及家属的知情同以及本院伦理委员会批准，且均储存于-80 ℃下备用。

1.2 主要试剂

DMEM培养基购于美国Gibco公司，胎牛血清购于杭州四季青公司，脂质体2000、胰蛋白酶、Trizol试剂、cDNA逆转录试剂盒和实时-PCR试剂盒购于美国Invitrogen公司。……