李 娜，张哲莹，朱会芳，贺国洋，韩正华，原志庆，王凡平，王明永

文献报道显示，乳腺癌耐药形成过程是一个多元而复杂的过程，除了与基因的调控有关外，还与信号通路的调控密切相关[1]。本课题组前期实验结果证实，miR-7-5p和miR-152-3p可通过协同抑制乳腺癌耐药细胞的上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition, EMT)进程，降低乳腺癌紫杉醇耐药性，但其具体的分子机制尚不清楚。β-catenin是Wnt/β-catenin信号通路的核心因子，游离的β-catenin进入细胞核可与兔抗人T细胞因子4(T cell factor 4, TCF4)结合形成复合物，进而影响下游靶基因的异常转录，促进肿瘤的发生[2]。本实验通过生物信息学软件预测发现，miR-7-5p和miR-152-3p均与TCF4 3′UTR区域存在互补的结合位点，猜测miR-7-5p和miR-152-3p可能通过共同靶向TCF4介导Wnt/β-catenin信号通路参与乳腺癌细胞紫杉醇耐药的形成。因此，进一步探讨miR-7-5p和miR-152-3p协同抑制乳腺癌细胞EMT进程及紫杉醇耐药的分子机制是否与共同调控Wnt/β-catenin信号通路有关，以揭示miR-7-5p和miR-152-3p调控乳腺癌紫杉醇耐药形成的可能机制。

1 材料与方法

1.1 主要试剂及细胞株Wnt/β-catenin信号通路激活剂LiCl购于天津市光复精细化工研究所。兔抗人TCF4单克隆抗体购于上海煊翎生物公司。兔抗人β-catenin单克隆抗体购于美国Cell Signaling公司，荧光素酶活性检测试剂盒购于美国Promega公司，乳腺癌MCF-7细胞株由本实验室保存，MCF-7/TAX细胞株购于上海和序生物公司。

1.2 方法

1.2.1细胞转染及处理 将对数生长期的MCF-7/TAX细胞以每孔106个接种至6孔细胞板上，置于细胞培养箱中常规培养。将细胞分为NC组(转染阴性对照)、miR-7-5p组(转染miR-7-5p mimics)、miR-152-3p组(转染miR-152-3p mimics)和miR-7-5p/152-3p组(共转染miR-7-5p和miR-152-3p)。根据上述分组进行转染，转染48 h后，采用Western blot法检测各组细胞中Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白β-catenin和TCF4的表达情况。……