彭聪 李盼 杨明强 陈丹扬 黄渊锋

肺癌的发病率和死亡率均居我国恶性肿瘤首位[1]。肺癌依据其组织形态和临床特征可分为小细胞肺癌（small cell lung cancer, SCLC）和非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer, NSCLC），NSCLC占肺癌的80%左右[2]。表皮生长因子受体（epidermal growth factot receptor, EGFR）属于跨膜受体酪氨酸激酶家族，是NSCLC最重要的驱动基因，靶向EGFR已经成为NSCLC临床治疗的主要手段之一[3]。以吉非替尼（Gefitinib）为代表的EGFR小分子抑制剂已成功应用于NSCLC患者的临床治疗，可显著延长患者无进展生存期[4]。然而，大部分接受治疗的患者在治疗9个月-12个月后不可避免会出现程度不同的治疗耐受，使得NSCLC总生存率难以获得明显提高[5]。因此，探索EGFRTKIs耐药机制、寻找逆转耐药的途径成为了亟待解决的问题。

叉头框蛋白C1（forkhead box protein C1, FOXC1）是叉头框蛋白家族重要成员，参与正常的胚胎发育[6]。研究[7,8]表明FOXC1在多种肿瘤中异常表达，在肿瘤发展和转移中起关键作用。研究发现FOXC1在NSCLC高表达，且与患者的预后不良密切相关[9]，敲除FOXC1能够抑制NSCLC的增殖、侵袭和转移[10]。然而，迄今对于FOXC1在NSCLC EGFR-TKI靶向治疗耐药中的作用及机制尚不明确。本研究拟探讨FOXC1促进NSCLC吉非替尼耐药的作用及可能机制。

1 材料与方法

1.1 材料 RPMI-1640培养基、胎牛血清、胰蛋白酶、Trizol试剂（Thermo Fisher公司）； FOXC1、SOX2、Nanog、β-actin抗体以及HRP标记山羊抗鼠IgG、山羊抗兔IgG（CST公司）；Annexin-APC细胞凋亡检测试剂盒（联科生物公司）；RIPA裂解液（碧云天生物技术公司）；ECL化学发光底物试剂盒（Pierce公司）；Quick Start Bradford蛋白定量试剂（Bio-Rad公司）；反转录试剂盒、实时荧光定量PCR（PrimeScript RT-PCR）试剂盒（TaKaRa公司）；PCR引物（上海生工公司）；Gefitinib、嘌呤霉素（Sigma公司），其余试剂均为国产分析纯以上。

1.2 细胞培养 人NSCLC吉非替尼敏感细胞株HCC827及其吉非替尼耐药细胞株HCC827/GR均由广州医科大学附属肿瘤医院研究所保藏。……