快速褪黑色素方法在免疫组织化学染色中的应用
2021-09-04赖续文王蔚仝桂慧朱铭谊赖晃文王卓才张伟
赖续文,王蔚,仝桂慧,朱铭谊 ,赖晃文,王卓才,张伟*
(南部战区总医院1病理科,2基础医学实验室,广州,510010)
在常规病理诊断中,恶性黑色素瘤的组织和细胞标本需要做免疫组织化学染色进行诊断与鉴别诊断,但这些组织和细胞标本由于黑色素颗粒的存在,而使细胞形态模糊、不易辨认,干扰免疫组织化学抗原和抗体的结合,且色素的颜色影响免疫组织化学染色结果的观察和判读,给病理诊断带来严重的影响。有效地去除黑色素且不影响后续检测是富含黑色素病变正确诊断的前提。目前有多种去除黑色素颗粒的方法[1,2],如过氧化氢脱色法、过氧化氢联合高锰酸钾等,但大都脱色效果欠佳。我们通过试验比较多种脱色方法,以探讨更加快速,高效和满意的脱色素方法,满足临床病理诊断的需要。
材料与方法
1 病例选择
选取我院2014年1月至2019年12月经病理确诊的20例恶性黑色素瘤,均为富含黑色素颗粒恶性黑色素瘤病例,选5例无色素性恶性黑色素瘤作为对照。
2 试剂
高锰酸钾和30%过氧化氢为广州化学试剂厂产品。一抗:单克隆抗体HMB45(批号:ZM-0187)、Melan-A(批号:ZM-0398)及CK(批号:ZM-0069)均购自北京中杉国际有限公司;二抗为 Envision免疫组织化学试剂盒购自丹麦DAKO公司。
3 褪色试剂配制方法
0.25%高锰酸钾:0.25g高锰酸钾溶液+蒸馏水100ml;0.5%高锰酸钾:0.5g高锰酸钾+蒸馏水100ml;10%过氧化氢溶液:30%过氧化氢30ml+蒸馏水60ml;15%过氧化氢溶液:30%过氧化氢50ml+蒸馏水50ml。
4 褪色方法
按脱色素方法分为A、B、C、D 4组。0.5%高锰酸钾水浴法(A组):组织切片经0.5%高锰酸钾溶液,55℃水浴加热4min,1%草酸溶液处理1s×3次。……
