王燕 刘明珠

(1江苏医药职业学院医学院，江苏 盐城 224005；2南京中医药大学附属南京市中西医结合医院皮肤科)

痤疮是一种面部毛囊皮脂腺的炎症性疾病，发病机制尚不明确，可能是由于皮脂分泌过多，痤疮丙酸杆菌增殖及雄激素睾酮增高等因素导致皮脂分泌增高、毛囊上皮角化异常及上皮细胞难以正常排出而蓄积于毛囊口，成为粉刺，严重者可增加患者的心理负担，影响生活和学习〔1,2〕。一般病程长，给予西药治疗，效果明显，但不良反应较大，且容易复发，面部容易残留瘢痕及沉淀色素〔3,4〕。中医在治疗痤疮方面具有一定优势，本研究根据中医文献及临床经验，研发了痤疮汤，治疗痤疮疗效确切且安全性高，但该方的机制探讨较少。p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路属于应激激活的蛋白激酶信号通路，是细胞外的生理及病理信号向细胞内转导的关键通路，研究显示p38MAPK信号通路也参与了痤疮的发生发展过程〔5〕。本研究主要分析痤疮汤治疗痤疮的可能机制，为痤疮汤的临床研究提供参考。

1 资料和方法

1.1受试动物 SPF级SD大鼠，雌雄各半由上海斯莱克实验动物有限公司提供，动物合格证号：SCXK(沪)2002-0010。适应性饲养1 w。痤疮丙酸杆菌(ATCC-6919，上海北诺生物科技有限公司，厌氧 4℃保存)。

1.2药品、试剂及仪器 痤疮汤的配方：黄芩、桑白皮、连翘和蒲公英各15 g，生地黄、玄参、白茅根、牡丹皮、丹参、郁金和枳壳各10 g，枇杷叶5 g，煎煮两次，合并煎液并浓缩至10 g/ml；BS224S万分之一电子天平(德国SARTORIUS)；苏木素-伊红(HE)全套病理系统(德国莱卡公司)；OlympusDP2-BSW型病理图像采集系统(日本奥林巴斯公司)；Bio-RAD680酶标仪(美国伯乐公司)。

1.3痤疮大鼠模型制备 取痤疮丙酸杆菌菌株1株，于血培养基接种，置于厌氧培养罐，37℃培养48 h，活化后可见灰白色，针尖样，表面光滑，行革兰染色可见短小棒状的杆菌，用生理盐水调整细菌浓度为 3×108/ml。吸取痤疮丙酸杆菌混悬液50 μl，在大鼠左侧耳廓皮下注射。

1.4分组与给药 将痤疮大鼠分为3组，即模型组，痤疮汤低剂量组(5 g/kg)和痤疮汤高剂量组(10 g/kg)；另设对照组将1.3中痤疮丙酸杆菌混悬液替换为生理盐水同法处理。每组各16只，雌雄各半。模型组和对照组均给予10 g/kg生理盐水，各组均连续治疗10 d。

1.5指标检测

1.5.1耳廓外观及病理观察 分别于给药前及给药10 d后测定各组耳廊厚度。给药结束，处死大鼠，制备耳廓病理切片，镜下观察并计数其炎症细胞。

1.5.2耳廓厚度记录 以千分尺测量大鼠给药前后的左耳廓同一部位的厚度。

1.5.3p38MAPK信号通路相关蛋白检测治疗前后从大鼠眼眶静脉丛取血，采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清中p38MAPK通路相关蛋白丝裂原活化的细胞外信号调节激酶(MEK)1、MEK2、细胞外信号调节激酶(ERK)1和ERK2水平。

1.6统计学处理 采用SPSS20.0软件进行单因素方差分析、SNQ-q检验、χ2检验。

2 结 果

2.1各组耳廓外观、厚度、HE病理及炎症细胞数量的比较 对照组大鼠左侧耳廓皮肤粉红，肌理细腻，无明显变化；模型组左侧耳廓注射部位持续红肿，局部形成小丘疹，少数质硬；痤疮汤低、高剂量组左侧耳廓有肿胀，耳廓略有增厚，丘疹少见。对照组左侧HE病理切片显示表皮、真皮和皮下组织结构清晰完整，无明显的炎症介质浸润。模型组皮下组织结构消失，炎症细胞弥漫性浸润，部分形成脓肿，毛囊面积增大或扩张，皮脂腺消失；痤疮汤低、高剂量组可见毛囊皮脂腺缩小，存在少数炎性细胞浸润。与对照组比，模型组耳廓皮肤的炎症细胞及耳廓厚度明显增高(P<0.05)，与模型组比，痤疮汤低、高剂量组的炎症细胞及耳廓厚度明显降低(P<0.05)，且呈剂量依赖性关系；痤疮汤低、高剂量组治疗后耳廊厚度显著低于治疗前(P<0.05)。见表1和图1。

图1 各组耳廓HE病理(×100)

表1 各组耳廓炎症细胞及耳廓厚度比较

2.2各组p38MAPK信号通路相关蛋白的比较 治疗前，与对照组比，模型组和痤疮汤低、高剂量组MEK1、MEK2、ERK1和ERK2均明显增高(P<0.05)；治疗后，与对照组比较，模型组MEK1、MEK2、ERK1和ERK2显著较高(P<0.05)；与模型组比较，痤疮汤组低、高剂量MEK1、MEK2、ERK1和ERK2明显降低，且显著低于治疗前(P<0.05)，且呈剂量依赖性关系。见表2。

表2 各组外周血p38MAPK信号通路相关蛋白的比较

3 讨 论

中医典籍里没有“痤疮”的病名，但痤疮的症状在中医属于“粉刺”、“面鼓”和“酒刺”的范畴，中医认为痤疮由于脾虚不运，水湿内停，耗损气血津液，郁久化热，无力抗邪，湿热灼痰凝滞肌肤而成，治疗当以除湿化痰、清热解毒及行气活血〔6～10〕。痤疮汤中黄芩、桑白皮、连翘和枇杷叶可清肺热，连翘与蒲公英可清胃热，生地黄、玄参和白茅根可清热凉血，牡丹皮与丹参凉血活血，郁金和枳壳疏肝理气活血，全方共奏清热解毒和除湿化痰之效。本研究结果显示，向痤疮大鼠给予痤疮汤，左耳廓的外观明显改善，微观病理显示痤疮汤可缩小毛囊皮脂腺，降低炎性细胞浸润，且临床症状及病理改善程度呈明显的剂量依赖性关系，提示痤疮汤可用于治疗痤疮。

p38MAPK信号通路是调节细胞生长、发育及分裂的信号核心部分，通过调控炎症的方式参与多种皮肤系统疾病的病理学过程，许多皮肤病变中p38MAPK信号通路处于过度激活的状态〔11～14〕，如调控p38MAPK信号通路可改善基质金属蛋白酶水平异常，进而治疗光老化人皮肤相关的细胞损伤，p38MAPK信号转导通路的激活是扁平苔藓发病的重要病因，p38MAPK参与光动力疗法杀伤皮肤鳞状细胞癌细胞的病理过程，p38MAPK纳入皮肤鳞状细胞癌潜在靶点的研究，p38丝裂原激活蛋白激酶通路可降低紫外线辐射后皮肤角质形成细胞凋亡及炎性损伤，烧伤皮肤再生医疗通过调控p38信号通路治疗糖尿病足，MEK1、MEK2、ERK1和ERK2是p38MAPK信号转导通路密切相关的蛋白，ERK是MAPK家族的重要成员，ERK是一类丝/苏氨酸蛋白激酶，已知的ERK家族有5个亚族，其中研究较为透彻的是ERK1和EKR2，MEK(MEK1与MEK2)位于ERK上游，可特异性抑制MEK的磷酸化阻断其下游ERK活化。研究显示，与治疗前比，紫外线辐射皮肤患者及糖尿病足患者治疗后外周血的MEK1、MEK2、ERK1和ERK2显著降低，提示p38MAPK信号转导通路激活的重要标志是MEK1、MEK2、ERK1和ERK2蛋白表达上调〔15〕，本课题结果提示痤疮可能激活了p38MAPK信号通路，促进炎性细胞浸润，促进了痤疮的发生发展，痤疮汤有助于调控p38MAPK信号通路，可用于治疗痤疮。

痤疮汤调控p38MAPK信号通路可能与该汤剂所含的有效成分相关。报道显示黄芩所含的黄芩素能够抑制c6大鼠神经胶质瘤细胞MEK-1蛋白的磷酸化表达，提示黄芩以MEK-1蛋白为靶点作用于炎症通路，不同浓度的黄芩素均能够抑制癌症细胞中 ERK1/2 的磷酸化上调〔16～18〕。含有桑白皮的清金化痰汤可通过抑制肺组织P38/c-Jun氨基末端激酶(JNK)MAPK信号通路的过度活化而减轻大鼠急性气道炎症损伤〔19〕。蒲公英所含的三萜类物质可抑制脂多糖(LPS)诱导的小鼠RAW264.7细胞p38和ERK1/2激酶的磷酸化，且呈剂量依赖关系而发挥抗炎作用〔20〕。

综上所述，痤疮汤治疗痤疮的可能机制在于影响p38MAPK信号通路。