贾添慧，王永杰,2，杨明树，时沙沙，董 蕾，喻勇新,2

(1.上海海洋大学 食品学院，上海 201306; 2.农业农村部 水产品质量安全贮藏保鲜风险评估实验室(上海)，上海 201306)

诺如病毒(Norovirus, NoV)属于杯状病毒科(Caliciviridae),诺如病毒属(Norovirus)。目前，NoV分为10个基因群(GI-GX)，其中，GI和GII型是最常见的人诺如病毒[1-2]。在2006—2016年间，中国发生超过132起NoV的暴发(8 133起案例)，其中99.9%的案例都是由GI和GII型NoV引起，造成了医疗资源浪费和经济的损失[3-5]。

NoV相关的急性肠胃炎暴发通常与被NoV污染的牡蛎有关[6]。相关研究表明，几乎所有的GI型和大部分GII型NoV的基因型在牡蛎中检出[7]。食用受NoV污染的牡蛎具有感染NoV的风险，并可能导致NoV在人群中暴发[8]。Meghnath等[9]在研究两起NoV相关的急性肠胃炎疫情(共449例)中发现，疫情都与食用受NoV污染的牡蛎有关。

本研究采用巢式RT-PCR法对上海市售牡蛎进行人诺如病毒(GI和GII型)污染状况的定期监测，旨在分析上海市售牡蛎中NoV的基因型和流行病学趋势，以期对市售牡蛎的食用安全评估和食源性NoV的防治提供参考。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 主要试剂

动物组织总RNA提取试剂盒(货号：GK3016)购自上海捷瑞生物工程有限公司；RNA稳定和储存溶液RNAlater购自上海翊瑞生物科技有限公司；一步法反转录PCR试剂盒(货号：RR055A)、PremixTaq(RR901A)购自宝生物工程(大连)有限公司；Top10感受态细胞，5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷(X-gal)，异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(Isopropyl β-D-Thiogalactoside, IPTG)，氨苄青霉素和PCR产物回收试剂盒(DP209)，100 bp DNA Ladder购自天根生化科技(北京)有限公司；LB固体和液体培养基购自北京陆桥技术股份有限公司；T载体PCR产物连接试剂盒(B522214)，GI和GII型NoV的巢式RT-PCR通用型引物购自生工生物工程(上海)股份有限公司(序列见表1)。……