改良SELEX技术筛选福氏志贺菌2a特异性适配体①
2021-08-23王国臻王玉格兰春阳李明成付桂莲北华大学医学技术学院吉林132013
王国臻 王玉格 兰春阳 李 翔 李明成 付桂莲(北华大学医学技术学院,吉林132013)
细菌性痢疾主要流行于卫生条件较差的发展中国家,全世界每年的病例总数高达1.647亿,死亡人数超过了60万人[1],在发展中国家大多数细菌性痢疾由福氏志贺菌(占60%)引起,在我国最为流行的是福氏和宋内志贺菌[2],主要检测方法有分离培养法、免疫学及分子生物学等方法。这些方法存在灵敏度低、成本高、耗时长、操作繁琐等缺点。因此建立一种快速、稳定、高效、特异性高、价格低的检测技术,对痢疾防治和临床用药都具有十分重要的意义[3]。
适配体是一种新型的分子识别元件,原理是基于指数富集技术(systematic evolution of ligands by exponential enrichment,SELEX)从随机寡核苷酸文库中筛选对靶物质具有高亲和性与高特异性的寡核苷酸序列单链DNA(ssDNA)或RNA[4]。与传统抗体相比,适配体优点是识别的靶分子范围广,可以与各种肿瘤细胞、细菌、蛋白质多肽、金属离子和病理切片等进行结合识别;有较高的特异性和亲和性;识别精细的抗原结构,也可鉴别交叉抗原;易于修饰,可大量和快速在体外合成。筛选周期短、成本低,比起抗体的制备,尤其是单克隆抗体的制备,整体制备周期缩短了60%以上的时间[5]。全细菌消减SELEX技术(whole-bacteria SELEX)是一种以完整细菌为靶标的筛选方法,经过12~15轮的筛选,中间采用消减菌筛选技术,即用与其种属相近、致病性相似的菌进行反向筛选,增强其特异性。目前,全细菌SELEX技术已经成功筛选出多种适配体,包括肠炎沙门氏菌、化脓性链球菌等适配体,实验证明适配体可显著抑制细菌侵入宿主细胞,发挥抗微生物感染的功效[6]。……
