王雪莲 孟亚红 孙丽华（上海复旦大学附属中山医院青浦分院血液科，上海201700）

T急性淋巴细胞白血病（T-acute lymphoblastic leukemia，T-ALL）是一种侵袭性血液肿瘤，约占所有淋巴细胞白血病的20%，成人发病率显著高于儿童［1］。PI3K/AKT及ERK通路上调是T-ALL发生发展的重要通路，抑制其上调可治疗T-ALL［2-3］。人参作为传统中草药已被广泛使用2 000余年，具有抗过敏、抗氧化、免疫刺激等特性，可调节血压、代谢和免疫功能，人参皂苷Rh4是人参三醇的主要活性单体，仅结合1个糖基，具有低极性、易被肠道吸收的特点，可通过调节ROS/JNK/p53通路诱导结直肠癌细胞凋亡［4］。Rh4还可诱导白血病K562细胞分化并抑制其增殖，但对T-ALL的作用和机制尚未阐明［5］。本研究主要探讨人参皂苷Rh4通过调控ERK和AKT信号通路对T-ALL细胞凋亡的影响。

1 材料与方法

1.1 材料 人T-ALL细胞系Molt4（CRL-1582，美国ATCC公司）；RPMI1640培养基（C11875500BT，美国Gibco公司）；人参皂苷Rh4（PHL85741，美国Sigma公司）；PI3K抑制剂LY294002（S1105）和MEK抑制剂U0126（S1102，Selleck公司）；CCK-8试剂盒（B20185364，碧云天公司）；Annexin V-FITC/碘化丙锭（PI）试剂盒（2170822）、FACSCantoⅡ流式细胞仪（加拿大BDBiosciences公司）；Model 680酶标仪（美国Bio-Rad公司）。

1.2 方法

1.2.1 细胞分组和处理 Molt4细胞培养于RPMI1640培养基，加入终浓度为0、10、20、40、60、80和100μmol/L的Rh4培养24、48和72 h，CCK-8法计算抑制率=（OD实验-OD对照）/OD对照×100%。为研究Rh4通过PI3K/AKT通路对T-ALL的作用，将细胞分为对照组、Rh4组、Rh4+LY294002组和LY294002组，Rh4浓度为42.75μmol/L，LY294002浓度为50μmol/L［5-6］。为分析Rh4通过MEK/ERK通路对T-ALL的作用，将细胞分为对照组、Rh4组Rh4+U0126组和U0126组，Rh4浓度为40μmol/L，U0126浓度为50μmol/L［7］。对照组加入等体积溶剂培养48 h。

1.2.2 CCK-8检测细胞增殖情况 将1×105个处理后细胞（150μl）接种于96孔板，分别在第24 h、48 h和72 h加入10μl CCK-8试剂，37℃孵育显色，酶标仪检测450 nm处吸光度。

1.2.3 流式细胞术检测细胞凋亡 处理后的细胞采用不含EDTA的0.25%胰蛋白酶消化……