万顺巧 吴琼丽 康双朋 杨滨燕 吴长有（中山大学中山医学院免疫学研究所，广州510080）

膀胱癌是指发生在膀胱黏膜上的恶性肿瘤，是泌尿系统最常见的恶性肿瘤，也是十大常见肿瘤之一，其发病率居全球第九位，病死率居泌尿系统恶性肿瘤前列。膀胱癌是一个巨大的社会负担，男性发病率为女性的3～4倍，其中女性患者确诊后预后更差，多数患者在出现肉眼血尿后经尿道膀胱镜检查才被确诊［1-2］。尽管有放疗、化疗、经尿道膀胱肿瘤切除术、BCG灌注治疗和免疫检查点抑制剂等多种治疗方式相结合，但膀胱癌的5年生存率和治疗效果并未得到很大的改善［3-4］。近年来在不同组织器官中发现组织驻留记忆T细胞（TRM），并在实体瘤中发挥着重要作用，肿瘤中的TRM与癌症患者的疾病进展相关［5-7］。此外有研究报道γδT细胞在炎症早期免疫应答早于Th17，在肿瘤免疫中发挥着重要作用［8］。有文献表示IL-17与炎症细胞变化有关，而膀胱癌的发生发展一直伴随着炎症［9］。因此本研究着重研究小鼠膀胱T细胞的表型、细胞因子及作用，为膀胱癌更进一步的免疫治疗研究提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验动物和细胞 6～8周龄C57BL/6雌性小鼠，购自中山大学实验动物中心（SYXK2015-0107）；MB49膀胱癌细胞由孙逸仙纪念医院生物岛十号实验室提供。

1.1.2 实验试剂 流式抗体：PE-CF549抗鼠CD3（145-2C11）、APC-CyTM7（OX-35）、FITC抗鼠CD4（GK1.500）、Percp-CyTM5.5抗鼠CD8（53-6.7）、Percp-CyTM5.5抗鼠CD44（IM7）、PE抗鼠γδT（V65）、FITC抗 鼠CD45（OX-1）、PE-CyTM7抗 鼠CD69（H1.2F3）、PE抗鼠CD103（M290）、PE-CyTM7抗鼠IFN-γ（XMG1.2）、PE抗鼠IL-17A（TC11-18H10），APC-CyTM7抗鼠TNF-α（MP6-XT22）、PE抗鼠CXCR3（CXCR3-173）和PE-CyTM7抗鼠CXCR5（2G8）均购自BD公司；免疫组化与荧光抗体：CD3一抗、γδT一抗和二抗均购自abcam公司；二抗CD3购自碧云天公司；……