岳宗进，刘汝银，于露，王新立，冯仲锴，王西彬

河南省中医院脊柱科，郑州 450000

约40%的椎间盘退变(intervertebral disc degeneration，IDD)患者会出现下腰痛，其中10%的患者长期处于残疾状态，给正常生活带来极大不便[1]。IDD发生时，椎间盘内的细胞可分泌大量炎性因子[主要包括白细胞介素-1β(interleukin-1β，IL-1β)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor α，TNF-α)等]，促进椎间盘细胞自噬、衰老和凋亡，进一步加速IDD[2]。补骨脂素是中药补骨脂的主要有效成分，有研究发现其对碘乙酸单钠诱导的大鼠骨关节炎疗效显著[3]，但对于IDD的疗效尚未明确。S期激酶相关蛋白2(S-phase kinase-associated protein 2，SKP2)是一种E3泛素连接酶，有研究发现其可抑制IDD时髓核细胞的凋亡[4]。采用补骨脂素干预晚期皮肤T细胞淋巴瘤细胞系可促进泛素特异性肽酶(USP)的表达[5]，且USP可激活SKP2而促进乳腺癌的进展[6]，由此推测，补骨脂素可能对SKP2具有调控作用。有研究发现，甲状旁腺激素相关蛋白(parathyroid hormone-related protein，PTHrP)在IDD的进展过程中表达增加[7]。在肿瘤骨转移过程中，补骨脂素可降低PTHrP蛋白的表达[8]。本研究旨在探讨补骨脂素对炎症环境下髓核细胞退变的影响及其机制。

1 材料与方法

1.1主要试剂及仪器 补骨脂素购自北京百奥莱博科技有限公司(货号：BP1041)；IL-1β、TNF-α和PTHrP重组蛋白购自北京百普赛斯生物科技股份有限公司；基质金属蛋白酶3(matrix metalloproteinase 3，MMP-3)、MMP-13和IL-6 ELISA试剂盒购自德国Qiagen公司；兔抗人Ⅱ型胶原蛋白(collagen type 2，Col Ⅱ)和SKP2单克隆抗体一抗购自美国Invitrogen公司；兔抗人PTHrP、沉默信号调节子1(silent information regulator 1，SIRT1)和甘油醛-3-磷酸脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPDH)多克隆抗体一抗以及兔抗Flag和Myc标签单克隆抗体一抗购自英国Abcam公司；鼠抗人蛋白聚糖单克隆抗体一抗和辣根过氧化物酶标记的兔抗鼠和山羊抗兔二抗购自美国Sigma公司；……