曹蔚堂，王文欣

0 引 言

脓毒症是由感染导致器官功能障碍的临床综合征，是导致危重症患者死亡的重要原因之一[1]。尽管抗感染治疗、重症监护及器官保护措施显著降低了脓毒症患者死亡率，然而患者长期预后仍然较差[2]。因此，研究影响脓毒症发病机制相关因素至关重要。炎症反应的过度激活导致的免疫功能障碍是脓毒症的主要发病机制[3]。巨噬细胞是针对微生物入侵防御的第一道防线，在先天性免疫系统中有重要的作用。自噬与炎症反应和免疫密切相关，脓毒症中自噬的激活能够通过负调控异常巨噬细胞的活化、减少炎症小体的活化和炎症因子的释放等途径发挥保护作用[4]。LncRNA人浆细胞瘤变体易位1(LncRNA-plasmacytoma variant translocation 1，LncRNA-PVCT1)是一种长链非编码RNA，研究表明PVT1与脓毒症大鼠炎症反应、心脏功能障碍及急性肾损伤的发生有关[5-6]。目前LncRNA-PVT1在脂多糖(LPS)诱导的巨噬细胞自噬的相关机制尚不清楚。因此，本研究通过LPS体外刺激巨噬细胞，并转染PVT1 siRNA重组质粒，探讨脓毒症中PVT1在巨噬细胞自噬中的可能作用机制，为脓毒症发病机制的研究提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 药品与试剂小鼠巨噬细胞株RAW264.7购自于中国科学院细胞库；DMEM、Glutamax、Sodium Pyruvate(11360070)、Lipofectamine 3000试剂盒购自美国Invitrogen公司；胎牛血清购自美国Gibco公司；Alexa Fluor 488 anti-rabbit IgG购自美国Thermo Fisher公司；RNAiso plus、PrimeScriptTMRT reagent Kit with gDNA Eraser、SYBR Premix Ex TaqTM II购自日本TAKARA公司；肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素6(IL-6)、酶联免疫吸附(ELISA)试剂盒购自美国BD Bioscience；兔抗鼠自噬微管相关蛋白轻链3(LC3)、Beclin-1、ATG12、p62一抗、β-actin、辣根过氧化物酶标记羊抗兔二抗、细胞计数试剂盒(CCK-8)、蛋白提取试剂盒、BCA蛋白定量试剂盒、双荧光素酶报告基因检测试剂盒购自上海碧云天生物技术公司；……